既然不能从宏观的大规模实验证实中医的效果，那可不可以从微观的角度研究下中医为什么会起作用呢？随着分子生物学的快速发展，越来越多的科研人员开始将中医与现代分子生物学结合起来，他们的研究结果也许会帮我们揭开中医神秘的面纱。
美国加州大学艾尔文分校医学院的John C. Longhurst团队在研究针灸治疗高血压效果的同时，发现实验组的血浆中的去甲肾上腺素（Norepinephrine）和高血压蛋白原酶（Renin），相较于对照组显著降低。这在一定程度上从分子层面上解释了针灸的作用原理。(4)
2010年美国罗切斯特大学医学中心Maiken Nedergaard教授发现，在小鼠的针灸实验中，一种叫做腺苷（adenosine）的抗损伤神经调节剂大量释放。当直接给小鼠注射腺苷受体时，针灸治疗的效果更好。(5)
推拿作为另外一种传统中医治疗手段，目前也被广泛使用，但是其作用原理也不是很清楚。加拿大著名高校麦克马斯特大学的Mark A. Tarnopolsky团队，在研究推拿在治疗肌肉损伤作用时，发现推拿激活了一些信号传递通路（那些分子的名字实在是太复杂，此处省略50字）。Tarnopolsky认为，推拿起作用的原理是，是减少炎症的发生，并促进线粒体的生成。(6)
2015年英国伦敦玛丽女王大学Fulvio D‘Acquisto的研究团队，发现推拿可以促进小鼠胸腺和脾脏T细胞（动物体内重要的免疫细胞）数量显著增加。因此D’Acquisto认为他们的研究表明推拿可以用于辅助治疗免疫缺陷及相关疾病，提高免疫力。(7)
以上的研究表明，从分子生物学的角度来看，针灸和推拿能够起到治疗的作用，是存在切实的证据的。尽管这类文章还很少，大部分质量都不高，毕竟中医开始接受科学的省视，也就是最近20多年的事情。因此广大的中医科研工作者还有很多的工作要做。我们也期待他们能够解答我们心中的疑惑。
https://www.nature.com/articles/srep10913#Fig1
Massage-like stroking boosts the immune system in mice抚摸接触式按摩增强了小白鼠的免疫力系统
Benjamin Major1, Lorenza Rattazzi1, Samuel Brod1, Ivan Pilipović2, Gordana Leposavić2,3 & Fulvio D’Acquisto1
Recent clinical evidence suggests that the therapeutic effect of massage involves the immune system and that this can be exploited as an adjunct therapy together with standard drug-based approaches. In this study, we investigated the mechanisms behind these effects exploring the immunomodulatory function of stroking as a surrogate of massage-like therapy in mice. C57/BL6 mice were stroked daily for 8 days either with a soft brush or directly with a gloved hand and then analysed for differences in their immune repertoire compared to control non-stroked mice. Our results show that hand- but not brush-stroked mice demonstrated a significant increase in thymic and splenic T cell number (p < 0.05; p < 0.01). These effects were not associated with significant changes in CD4/ CD8 lineage commitment or activation profile. The boosting effects on T cell repertoire of massagelike therapy were associated with a decreased noradrenergic innervation of lymphoid organs and counteracted the immunosuppressive effect of hydrocortisone in vivo. Together our results in mice support the hypothesis that massage-like therapies might be of therapeutic value in the treatment of immunodeficiencies and related disorders and suggest a reduction of the inhibitory noradrenergic tone in lymphoid organs as one of the possible explanations for their immunomodulatory function.
最近的临床证据表明，按摩的治疗效果涉及免疫系统，这可以作为一种辅助疗法与标准的药物疗法一起使用。在这项研究中，我们研究了这些效应背后的机制，探索抚摸接触作为按摩疗法替代物在小鼠体内的免疫调节功能。C57/BL6小鼠每天用软刷或直接用戴手套的手抚摸接触8天，然后分析其免疫系统与对照组未抚摸接触小鼠的差异。结果表明，手抚摸接触而非刷抚摸接触小鼠胸腺和脾脏T细胞数量显著增加（p<0.05；p<0.01）。这些效应与CD4/CD8线性承诺或活化曲线的显著变化无关。推拿疗法对T细胞的促进作用与淋巴器官的去甲肾上腺素能神经支配减少有关，并抵消了氢化可的松在体内的免疫抑制作用。我们在小鼠身上的研究结果支持这样的假设，即按摩疗法在治疗免疫缺陷和相关疾病方面可能具有治疗价值，并建议减少淋巴器官中抑制性去甲肾上腺素能的张力，作为其免疫调节功能的可能解释之一。
（附加内容：按摩胸腺提高免疫力 对人体来说，对付癌细胞靠的是我们身体勇敢忠诚的“T淋巴细胞”。“T淋巴细胞”是在骨髓中制造产生的，它的前身是“T淋巴系前体细胞”，（又叫前体T细胞）。这种年轻幼稚的前体T细胞就象刚应征入伍的新兵一样，它们必须经过特殊培训才能管用，才能上前方打仗杀敌，谁来负责训练这批新兵使之成为能征惯战的特种兵呢？是胸腺，胸腺是T细胞分化和成熟的场所，胸腺是人体的“士兵培训营”。“T淋巴系前体细胞”经血循环进入胸腺后，在胸腺激素的影响下最终分化为成熟的T细胞，随后被释放入血液循环中冲锋杀敌！因而T细胞也称胸腺依赖性T淋巴细胞。十分遗憾的是，人体从青年进入壮年胸腺功能就开始衰退了，至使人的免疫力逐步降低，慢性病逐步产生，乃至癌症也慢慢形成了。
这时，我们可以坚持不断地刺激胸腺的特定部位，用右手食指、中指轻轻按摩胸腺部位，即胸部正中两侧、喉结以下，从上到下，几十下，每天进行，坚持日久，必有好处。这样就可以让其逐渐恢复以往的功能，加紧培育英勇的T淋巴细胞，毫不留情地消灭可恶的癌细胞，取得我们生命之战的胜利）
Massage therapy is one of the many forms of rehabilitation medicine that has long been used as adjunct treatment for a variety of mental and physical conditions. Indeed, massage has been reported to ease muscle pain and favour repair, to alleviate symptoms of nausea and fatigue in cancer patients, to contribute to stress reduction and increase attention1,3 and to promote growth and development. In recent times, massage has gained further popularity in clinical wards because of its applicability to a different range of patients from children to elderly, professionals in the field of competitive sports and ‘non-active’ people from all walks of life. Despite this wide range of applications, very little is known about the cellular and molecular mechanisms behind the beneficial effects of massage. Indeed, the lack of standardisation, the subjectivity of the receiver and the provider, together with the multiplicity of tissues and organs ‘activated’ by massage, has made this adjunct therapy a difficult practice to be studied in experimental terms.
The best way to describe the practice of massage is as a mechanical manipulation of body tissues by means of rhythmically applied strokes and pressure. Following this definition, it is reasonable to think that one mechanism in which massage initiates its effects is through stimulation of the nervous system via different mechanoreceptors found in the skin (e.g. Meissner and Pacinian corpuscles, Merkel disc endings, Ruffini and free nerve endings). The pressure exerted on these receptors is then translated in different effects. More specifically, it can activate pathways that transmit signals along the long and myelinated nerve fibres to the lymbic area of the brain or can influence the release of soluble messengers神经传导物质 such as substance P or serotonin that are considered responsible for mediating the ‘relaxing effects’ of massage. Together these evidences suggest that emotional wellbeing and neuronal modulation are key elements for the therapeutic effectiveness of massage.
按摩疗法是众多康复医学形式之一，长期以来一直被用作各种精神和身体状况的辅助治疗。事实上，据报道，按摩可以缓解肌肉疼痛，促进修复，缓解癌症患者的恶心和疲劳症状，有助于减轻压力，增加注意力，促进生长发育。近年来，按摩因其适用于从儿童到老年的不同病人、竞技运动领域的专业人士和来自各行各业的“非活跃”人群而在临床病房得到进一步普及。尽管应用范围如此广泛，但人们对按摩有益作用背后的细胞和分子机制知之甚少。事实上，缺乏标准化，接受者和提供者的主观性，以及按摩“激活”的组织和器官的多样性，使得这种辅助治疗成为一种很难从实验角度进行研究的实践。
描述按摩实践的最佳方法是通过有节奏的接触和压力对身体组织进行机械操作。根据这一定义，我们有理由认为，按摩引发其效果的一种机制是通过皮肤中的不同机械感受器刺激神经系统（如Meissner and Pacinian corpuscles,、默克尔椎间盘末梢、鲁菲尼和自由神经末梢）。施加在这些受体上的压力然后被转换成不同的效果。更具体地说，它可以激活沿着长有髓神经纤维传递信号到大脑的淋巴区域的通路，或者可以影响神经传导物质的释放，例如P物质或血清素，它们被认为负责调解按摩的“放松效应”。这些证据表明，情绪健康和神经调节是按摩疗效的关键因素。
1William Harvey Research Institute, Barts and the London School of Medicine and Dentistry, Queen Mary University of London, London, UK. 2Immunology Research Centre “Branislav Janković”, Institute of Virology, Vaccines and Sera “Torlak”, Belgrade, Serbia. 3University of Belgrade-Faculty of Pharmacy, Department of Physiology, Serbia should be replaced by Department of Physiology, Belgrade, Serbia. Correspondence and requests for materials should be addressed to F.D’A. (email: F.Dacquisto@qmul.ac.uk)
威廉·哈维研究所、巴特斯和伦敦医学和牙科学院、英国伦敦玛丽女王大学。2塞尔维亚贝尔格莱德病毒、疫苗和血清研究所布兰尼斯拉夫·扬科维奇免疫研究中心。3塞尔维亚贝尔格莱德大学生理学系药学系应改为塞尔维亚贝尔格莱德生理学系。信件和材料要求应寄往F.D.A.（电子邮件：F.Dacquisto@qmul.ac.uk）
We are particularly interested in ways by which emotional wellbeing regulates the immune response. Intrigued by recent clinical investigations that have explored the use of massage as mean of providing a combined positive effect on the emotional wellbeing and immune response, we sought to set up an experimental system that would allow us to explore the immunomodulatory effects of massage-like therapy in mice. To this aim we tested the effects of stroking as surrogate for massage and we also compared human (finger-driven) and non-human (brush stroke-driven) approaches to assess two different types of stroking. Our results provide experimental evidence supporting the hypothesis that massage-like therapies have an immunomodulatory effect and suggest another possible cellular and molecular mechanism behind the therapeutic effects of this therapy.
我们对情绪健康调节免疫反应的方式特别感兴趣。最近的临床研究探索了按摩作为一种对情绪健康和免疫反应产生积极影响的手段，我们对此很感兴趣。我们试图建立一个实验系统，使我们能够探索按摩疗法对小鼠的免疫调节作用。为了达到这个目的，我们测试了作为按摩替代品的抚摸接触效果，并且我们还比较了人类（手指驱动）和非人类（刷子驱动）的抚摸接触方法，以评估两种不同类型的抚摸接触。我们的研究结果为推拿疗法具有免疫调节作用的假说提供了实验证据，并提示了推拿疗法治疗效果背后的另一种可能的细胞和分子机制。
Materials and Methods
Mice and chemicals. We used 5-week old C57BL/6 male mice purchased from Charles River for all experiments. Animals were housed in groups of maximum 6 mice per cage under specific-pathogen-free conditions and with free access to food and water. Mice were housed for 7 days prior to testing, making them 6 weeks old when the massage treatment began. All tests were conducted in a blinded fashion and according to the UK Animals (Scientific Procedures) Act, 1986. All experimental protocols were approved by the local biological service unit at Queen Mary University of London. Mice treated with hydrocortisone received a suspension of 2.5 mg of hydrocortisone hemisuccinate (Sigma-Aldrich) in 200 μ l of PBS.
Massage-like stroking therapy. Tests were performed double-blind during the light phase of the light-dark cycle. All efforts were made to minimize mouse discomfort in these behavioural experiments.
Mice were brought to the testing room at least 30 minutes before the start of the test session to allow habituation to the testing environment. Unless otherwise specified, standard lighting (~50 lux) and quiet conditions were maintained throughout each experiment. Mice were divided into three groups: 1) control (non-stroked) mice; 2) brush-stroked mice; 3) hand-stroked mice, each involving 6 mice per group, per experiment. Treatments were administered by placing a single mouse into a new cage every day as previously described. These cages were identical to the home cage, however the lid, shredded paper, food and water were removed. New cages were used for each mouse to reduce odour from the previous mouse. Brush and hand stroked mice were stroked at a pressure of 100-150 mmH2O (or 7-11 mmHg) and at a speed of about 3 cm/sec according to a previously described protocol whereas control mice were not touched (by hand or brush) throughout the 60-minute treatment. Brush stroking was applied using a No.5 da Vinci paintbrush while hand stroking was applied using three fingers of the preferred hand of the investigator as previously described. For the hand-stroked treatment, the experimenter wore Bizzybee disposable vinyl gloves (Amazon, UK). These odourless gloves reduced human smell but maintained human contact i.e. warmth and pressure. Mice were stroked on the hairy skin found on the posterior dorsal thoracic and proximal hind limb in a cephalocaudal fashion (head to tail). Both brush and hand stroked mice received approximately strokes every 5 minutes (0.5-1.0 Hz). Experiments were performed by 3 different experimenters trained to perform the same procedure. The reproducibility of the manual stimuli was tested and confirmed by similar application of pressure to a small balloon connected to a pressure gauge as previously reported .
材料和方法
老鼠和化学品。我们使用从查尔斯河购买的5周龄C57BL/6雄性小鼠进行所有实验。在特定的无病原体条件下，每笼最多可饲养6只小鼠，并可自由获取食物和水。在测试之前，老鼠被安置了7天，当按摩治疗开始时，老鼠已经6周大了。所有试验均以盲法进行，并根据1986年《英国动物（科学程序）法》进行。所有实验方案都得到了伦敦玛丽女王大学当地生物服务部门的批准。用氢化可的松治疗的小鼠在200毫升PBS中接受2.5毫克氢化可的松半琥珀酸盐（西格玛-奥尔德里奇）的悬浮液。
按摩式抚摸接触疗法。在明暗循环的光阶段进行双盲试验。所有的努力都是为了尽量减少老鼠在这些行为实验中的不适。
在测试开始前至少30分钟，老鼠被带到测试室，以适应测试环境。除非另有规定，否则在每次实验中，均保持标准照明（~50勒克斯）和安静条件。小鼠分为三组：1）对照（非抚摸接触）小鼠；2）刷子抚摸接触小鼠；3）手抚摸接触小鼠，每组6只。如前所述，每天将一只老鼠放入一个新笼子中进行治疗。这些笼子和家里的笼子一样，但是盖子、碎纸、食物和水都被移走了。每只老鼠都用了新的笼子来减少前一只老鼠的气味。根据先前描述的方案，刷子和手抚摸接触小鼠的压力为100-150 mmH2O（或7-11 mmHg），速度约为3 cm/s，而对照小鼠在整个60分钟的治疗过程中未被触摸（用手或刷子）。如前所述，使用5号达芬奇画笔进行笔触，同时使用研究人员首选手的三个手指进行笔触。在手抚摸接触治疗中，实验人员戴着Bizzybee一次性乙烯基手套（英国亚马逊）。这些无味手套减少了人的气味，但保持了人的接触，即温暖和压力。用从头到尾法（从头到尾）抚摸接触小鼠背部后肢和后肢近端的多毛皮肤。刷子和手抚摸接触的老鼠每5分钟都接受大约一次抚摸接触（0.5-1.0赫兹）。实验是由3个不同的实验者进行训练，以执行相同的程序。如前所述，通过对连接在压力计上的小气球施加类似的压力来测试和确认手动刺激的再现性。
Open field activity test. The open field test (OFT) is an ethologically based paradigm that provides objective measures of exploratory behaviour as well as a valid initial screen for anxiety-related behaviour in rodents. The test was carried out as previously described . The apparatus consisted of a white PVC arena (50 cm × 30 cm × 20 cm) divided into 10 cm × 10 cm squares (n = 15). The 3 central squares defined the “centre” region. Each mouse was placed in a corner square, facing the wall, and observed and recorded for 3 minutes. The total number of squares crossed (all four paws in), total number of rears (defined as both front paws off the ground, but not as a part of grooming) and number of centre crossings was recorded. The walls and floor of the arena were thoroughly cleaned between each trial.
Light-dark shuttle box. In this test, exploratory activity reflects the combination of hazard and risk avoidance24. The apparatus consisted of a 45 cm × 20 cm × 21 cm box, divided into two distinct compartments: one-third (15 cm long) painted black, with a black lid on top, the remaining two thirds painted white and uncovered. A 2.5 cm × 2.5 cm opening joined the two compartments. One side of the bright box was transparent to enable behavioural assessment and the averseness of this compartment was increased by additional illumination supplied by a 50 W lamp placed 45 cm above the centre of the box floor. The test was performed in accordance with a previous published protocol . Each mouse was placed in the bright compartment, facing away from the opening and allowed to explore the box for 5 minutes. Dependent variables included the time spent in the light area, latency to cross to the dark area (all four paws in) and the total number of transitions between compartments. The apparatus was cleaned after each trial.
Fluorescence histochemistry and quantification of catecholamine-containing nerve fibres. Thymus and spleen were cut with a cryostat to obtain serial 16 μ m thick sections and treated according to a modified version of the sucrose phosphate glyoxylic acid (SPG) method to identify
野外活动测试。
开放领域测试（OFT）是一种基于行为学的研究范式，它提供了探索行为的客观测量方法，同时也为啮齿动物焦虑相关行为提供了有效的初始筛查。试验按前面所述进行。该装置由一个白色PVC竞技场（50 cm x30 cm x20 cm）组成，分为10 cm x10 cm正方形（n=15）。3个中心正方形定义了中心区域。每只老鼠都被放在一个角落里，面朝墙壁，观察并记录了三分钟。记录了交叉的正方形总数（全部四个爪子都在）、后部总数（定义为两个前爪离开地面，但不作为梳理的一部分）和中心交叉的数量。在每次试验期间，竞技场的墙壁和地板都被彻底清洗干净。
明暗穿梭箱。
在这个测试中，探索性活动反映了危险和风险规避的结合24。仪器由一个45厘米x20厘米x21厘米的盒子组成，分成两个不同的隔间：三分之一（15厘米长）涂成黑色，顶部有一个黑色盖子，其余三分之二涂成白色，没有盖。一个2.5厘米x 2.5厘米的开口连接了两个隔间。明亮的盒子的一侧是透明的，以便进行行为评估，在盒子地板中心上方45厘米处放置一盏50瓦的灯，增加了对这个隔间的厌恶。试验是按照先前公布的方案进行的。每只老鼠都被放在明亮的隔间里，面朝远离开口的地方，让它们在盒子里探索5分钟。因变量包括在光照区域花费的时间、穿过黑暗区域的延迟（所有四个爪子都在）和隔间之间的总转换次数。每次试验后都要清洗仪器。
儿茶酚胺神经纤维的荧光组织化学和定量研究。用低温恒温器切取胸腺和脾脏，获得连续16m厚的切片，并根据改良的蔗糖磷酸-乙醛酸（SPG）法进行处理，以确定
Figure 1. Massage-like stroking paradigm and associated procedures. The scheme in the figure summarizes the overall experimental procedure followed in this study. C57BL/6 male mice were divided in 3 groups of 6 mice and subjected to massage-like therapy (hand-stroked or brush-stroked) or left untouched (control) for 7 days as detailed in Materials and Methods. At the end of the treatment, mice were subjected to behavioural tests and analysed for their immune repertoire.
cathecolamine-containing nerve fibres. Briefly, sections were first dipped in a solution containing 1% glyoxylic acid, 0.2 M sucrose, and 0.236 M potassium phosphate monobasic (pH 7.4), then drained and finally covered with non-auto fluorescent immersion oil, heated at 95 °C for 2.5 min. To prevent diffusion and photodecomposition of fluorescence, the sections were analysed and photographed on the same day using an Olympus BH 2 fluorescence photomicroscope (Olympus Optical Co. Ltd, Tokyo, Japan) equipped with exciter filter BG 12 and barrier filter Y495, Color View III digital camera (Olympus Soft Imaging Solutions GmbH, Münster, Germany) and AnalySIS FIVE software (Olympus Soft Imaging Solutions). The digital quantification of fluorescence intensity was performed using ImageJ software as described previously 27. Photomicrographs of 10 randomly chosen relevant test areas (×40 magnification) were taken in each of the 5 sections per thymus. After converting images to gray-scale mode, outlines of each fluorescent nerve profile were traced and intensities of fluorescent signal recorded (pixel intensity per unit area). To correct for the background fluorescence, the outlines were then placed on the closest adjacent areas not containing fluorescent material and the obtained values were subtracted from those corresponding to nerve profiles. The data were presented as fluorescence intensities of groups subjected to experimental treatment normalized to those of respective control groups. Noradrenaline concentration. Noradrenaline concentrations in spleen and thymus were determined using ELISA. The analysis was performed using a commercial ELISA kit (Labor Diagnostika Nord GmbH & Co., Nordhorn, Germany), according to the manufacturer’s protocol. Quantification of nerve fibre density. Fluorescent nerve fibre density in 10 randomly taken images (×40 magnification) from 5 thymic sections per animal was measured using a stereological grid point-counting approach28 and expressed as the percentage of field area occupied by the fluorescent nerve profiles. Flow cytometric analysis. Lymphocytes collected from lymphatic organs (e.g. thymus, spleen) were stained in 100μ l of FACS buffer (PBS containing 5% FCS and 0.02% of NaN2). The antibodies used were anti-CD3 PE (clone 145-2C11, eBioscience), anti-CD4 FITC (clone GK 1.5, eBioscience), anti-CD8 Cy5 (clone 53-6.7, eBioscience), anti-CD25 FITC (clone PC61, BioLegend), anti-CD69 PE (clone H1.2F3, eBioscience). Cells were labeled with the appropriate concentration of conjugated antibodies for 1 h at 4 °C as previously described29. After labeling, cells were washed and analyzed. In all experiments stained cells were acquired with FACScalibur flow cytometer and analyzed using FlowJoTM software (Tree Star, Inc., Oregon Corporation). T cell activation and cytokine production. Splenic T cells (1 × 105 cells/200 μ l) were incubated with medium alone or stimulated with the indicated concentration of plate-bound anti-CD3 and anti-CD28 in 96-well plates. For CD25 and CD69 upregulation, lymph node T cells were stimulated for about 16 hr while the supernatants of 24 hr culture were used for cytokine production. Cytokine production was measured by cytometric bead assay using the mouse Th1/Th2 10plex kits (eBioscience). Each sample (25 μ l of cell culture supernatant) was incubated with 50 μ l bead mixture and 50 μ l mix of antibodies
图1。按摩式抚摸接触模式和相关程序。图中的方案总结了本研究所遵循的总体实验程序。将C57BL/6雄性小鼠分为3组，每组6只，按材料和方法分为按摩样治疗（手抚摸接触或刷抚摸接触）或不抚摸接触（对照）7天。治疗结束后，对小鼠进行行为学测试，并分析其免疫系统。
含有神经纤维的阴极射线胺。简单地说，首先将切片浸入含有1%乙醛酸、0.2 M蔗糖和0.236 M磷酸二氢钾（pH7.4）的溶液中，然后排干，最后用非自动荧光浸油覆盖，在95.C下加热2.5分钟，以防止荧光的扩散和光分解，使用奥林巴斯BH 2荧光显微显微镜（奥林巴斯光学有限公司，日本东京）对截面进行分析，并在同一天拍摄，该显微镜配备有励磁滤波器BG 12和屏障滤波器Y495，彩色视图III数码相机（奥林巴斯软成像解决方案有限公司，慕尼黑，德国）和分析五个软件（奥林巴斯软成像解决方案）。如前27所述，使用ImageJ软件对荧光强度进行数字量化。在胸腺的5个切片中各取10个随机选择的相关试验区域（放大40倍）的显微照片。将图像转换为灰度模式后，跟踪每个荧光神经轮廓的轮廓并记录荧光信号的强度（单位面积像素强度）。为了校正背景荧光，然后将轮廓放在不含荧光物质的最近邻近区域，并从对应于神经轮廓的值中减去所获得的值。数据以实验治疗组的荧光强度表示，与相应对照组的荧光强度标准化。去甲肾上腺素浓度。用ELISA法测定脾脏和胸腺中去甲肾上腺素的浓度。根据制造商的方案，使用商业ELISA试剂盒（德国诺德霍恩劳工诊断公司）进行分析。神经纤维密度的量化。用体视学网格点计数法28测量每只动物5个胸腺切片上随机采集的10张图像（放大40倍）中的荧光神经纤维密度，并表示为荧光轮廓占用的野面积百分比。流式细胞术分析。从淋巴器官（如胸腺、脾脏）采集的淋巴细胞在100ml的FACS缓冲液（含5%FCS和0.02%NaN2的PBS）中染色。所用抗体为抗CD3-PE（克隆145-2C11，eBioscience）、抗CD4-FITC（克隆GK 1.5，eBioscience）、抗CD8-Cy5（克隆53-6.7，eBioscience）、抗CD25-FITC（克隆PC61，BioLegend）、抗CD69-PE（克隆H1.2F3，eBioscience）。如前所述，用适当浓度的结合抗体标记细胞1h至4.C标记后，对细胞进行清洗和分析。在所有实验中，用FACScalibur流式细胞仪采集染色细胞，并使用FlowJoTM软件（Tree Star，Inc.，Oregon Corporation）进行分析。T细胞活化和细胞因子产生。将脾脏T细胞（1×105细胞/200m l）单独与培养基孵育，或在96孔板中以指定浓度的板结合抗CD3和抗CD28刺激。对于CD25和CD69的不调节，刺激淋巴结T细胞约16小时，同时用培养24小时的上清液产生细胞因子。用小鼠Th1/Th2 10plex试剂盒（eBioscience）进行细胞计数。每个样品（25毫升细胞培养上清液）用50毫升珠状混合物和50毫升抗体混合物孵育
Figure 2. Massage-like stroking does not influence anxiety-like behavior. C57BL/6 male mice were subjected to massage-like therapy (hand-stroked or brush-stroked) or left untouched (control) for 7 days and then tested for their level of anxiety like-behaviour. (A) The bar graphs show the total number of squares crossed, centre crossings and rears recorded during a 5-minute session of the open field test. The pictures (from the top) show representative images of the square, centre crossing and rears, respectively. (B) The bar graphs show the time spent in the light, number of crossings and latency to the first cross recorded during a 5-minute trial in the light-dark shuttle box test. The pictures (from the top) show representative images of mouse in the light area, fully crossed (when the full four paws are in the dark side of the box) and at the first cross, respectively. Values are expressed as mean ± S.E.M. and representative of four experiments, each involving 6 mice per group
conjugated with biotin for 2 h. After two washes, PE-conjugated streptavidin was added and samples were left rocking for 1 hour in dark. Finally, samples were washed and stored overnight at 4 °C. Standards diluted serially for 7 times were prepared and processed at the same time. Samples were analysed using BD LSR Fortessa and the FlowCytomix software (eBioscience). Statistical analysis. Results were analysed as previously described30,31 using GraphPad. A one-way ANOVA followed by Bonferroni post-test or Newman-Keuls post-hoc comparisons was used for comparison between groups. Statistical significance was determined at p < 0.05. The results were expressed as mean ± S.E.M.
Results Massage-like therapy does not cause changes in anxiety-like behaviour. The scheme in Fig. 1 summarizes the experimental protocol we used for this study. We chose to administer the massage-like therapy for a period of 8-days in light of previous investigations, in which we assessed the effect of ‘behavioural modulators’ such as enriched environment on the immune system (unpublished data). In
图2。像按摩一样抚摸接触不会影响像焦虑一样的行为。C57BL/6雄性小鼠接受按摩式治疗（手抚摸接触或刷子抚摸接触）或不抚摸接触（对照）7天，然后测试其焦虑样行为水平。（A） 柱状图显示了在5分钟的野外试验过程中记录的正方形交叉、中心交叉和后部的总数。图片（从顶部）分别显示了广场、中央交叉路口和后方的代表性图片。（B） 条形图显示了在明暗穿梭试验中5分钟试验期间记录的在光线下的时间、交叉次数和第一次交叉的延迟。这些图片（从顶部）分别显示了鼠标在明亮区域、完全交叉（当全部四只爪子位于盒子的黑暗侧）和第一个交叉处的代表性图像。数值以平均S.E.M.表示，代表四个实验，每组6只小鼠
与生物素结合2小时。两次洗涤后，加入聚乙烯结合链霉亲和素，样品在黑暗中摇晃1小时。最后，将样品洗涤并在4.C下储存过夜。同时制备并处理连续稀释7次的标准品。使用BD LSR Fortessa和FlowCytomix软件（eBioscience）分析样本。统计分析。结果分析如前所述，30，31使用图形。组间比较采用单因素方差分析，然后进行Bonferroni后测或Newman-Keuls后测比较。经统计学处理，p<0.05。结果用平均数表示
结果推拿式治疗不引起焦虑样行为改变。图1中的方案总结了我们用于本研究的实验协议。根据之前的研究，我们选择使用类似按摩的疗法，为期8天，在这些研究中，我们评估了行为调节剂（如强化环境）对免疫系统的影响（未公布的数据）。在
Figure 3. Massage-like stroking boosts T cell development. C57BL/6 male mice were subjected to massage-like therapy (hand-stroked or brush-stroked) or left untouched (control) for 7 days and then analysed for their T cell repertoire in the thymus. (A) The bar graph shows the total number thymocytes recovered at the end of the treatment while (B) shows representative dot plots of the different subpopulations of thymocytes: double negative CD4-CD8- (DN; bottom left quadrant), double positive CD4+CD8+ (DP; top right quadrant), single positive CD4+ (CD4SP; bottom right quadrant), single positive CD8+ (CD8SP; top left quadrant). (C) Shows the absolute numbers of each subpopulation mentioned above. Values are expressed as mean ± S.E.M. and representative of four experiments, each involving 6 mice per group. ** p < 0.01; ***p < 0.001.
this and other similar experimental settings we found that changes start to occur and become significant at this time point. Throughout the 8 days of massage-like therapy, we monitored indicators of welfare (http://www.nc3rs. org.uk/behaviour-laboratory-mice-indicator-welfare-state-genetically-modified-mice) such as weight change, coat condition, piloerection, freezing, number of faecal boli, food and water intake, and social aggressive behaviour. None of these measurements resulted in any significant difference (data not shown) between the 3 groups. We assessed further changes in behaviour and wellbeing, in particular anxiety-like behaviour, using two standard methods: the open field and the light-dark shuttle box. No differences in the number of squares, center crossings or rears were observed in the open field test among the three groups (Fig. 2A). Similarly, both brush- and hand-stroked mice showed no significant difference compared to control in the number of light/dark transitions or time spent in the lit area when tested with the light/dark shuttle box (Fig. 2B). Together these results suggested that massage-like stroking did not induce any significant changes in welfare, exploratory activity or anxiety like behavior.
Massage-like therapy increases thymus cellularity and boosts the T cell repertoire. To assess the possible impact of massage-like therapy on the immune response we first tested its effects on T cell development in the thymus. The results showed an increase in thymocyte count in massaged mice in comparison to control non-stroked mice (Fig. 3A). Interestingly, significant differences were obtained only with hand-stroked mice (p < 0.01) but not with brush-stroked ones. This increase in cellularity was not T cell-lineage specific since FACS analysis of thymocytes for their CD4/CD8 profile showed only a slight difference between the CD4+/CD8+ cell percentages between control and brush- or hand-stroked
图3。按摩式抚摸接触促进T细胞发育。C57BL/6雄性小鼠接受按摩式治疗（手抚摸接触或刷子抚摸接触）或不抚摸接触（对照）7天，然后分析其胸腺中的T细胞。（A） 条形图显示治疗结束时恢复的胸腺细胞总数，而（B）显示胸腺细胞不同亚群的典型点图：双阴性CD4-CD8-（DN；左下象限）、双阳性CD4+CD8+（DP；右上象限）、单阳性CD4+（CD4SP；右下象限），单个阳性CD8+（CD8SP；左上象限）。（C） 显示上述每个亚群的绝对数。数值以平均S.E.M.表示，代表四个实验，每组6只小鼠。**p<0.01；***p<0.001。
这个和其他类似的实验设置，我们发现变化开始发生，并在这个时间点变得显著。在8天的按摩式治疗中，我们监测福利指标（http://www.nc3rs.org.uk/behavior ... te-genetic-modified mice），如体重变化、毛发状况、毛发勃起、冷冻、粪便疾病数量、食物和水摄入量以及社会攻击行为。这些测量结果均未导致3组之间的任何显著差异（数据未显示）。我们使用两种标准方法评估行为和幸福感的进一步变化，特别是焦虑样行为：开阔视野和明暗穿梭箱。在三组之间的野外试验中，没有观察到正方形、中心交叉点或后部的数量差异（图2A）。同样地，当用光/暗穿梭箱进行测试时，刷子和手抚摸接触的小鼠在光/暗转换的次数或在照亮区域花费的时间方面与对照组相比没有显著差异（图2B）。这些结果表明，按摩式的抚摸接触并没有引起幸福感、探索性活动或焦虑样行为的任何显著变化。
按摩式疗法增加了胸腺细胞的数量，增加了T细胞的数量。为了评估按摩疗法对免疫反应的可能影响，我们首先测试了它对胸腺T细胞发育的影响。结果显示，与对照组相比，按摩组小鼠的胸腺细胞计数增加（图3A）。有趣的是，只有用手抚摸接触的老鼠才有显著差异（p<0.01），而用刷子抚摸接触的老鼠没有显著差异。细胞数量的增加并不是T细胞谱系特异性的，因为胸腺细胞CD4/CD8的FACS分析显示，对照组和刷子组或手抚摸接触组的CD4+/CD8+细胞百分比之间只有轻微的差异
Figure 4. Massage-like stroking boosts the repertoire of mature T cells. C57BL/6 male mice were subjected to massage-like therapy (hand-stroked) or left untouched (control) for 7 days and then analysed for their T cell repertoire in the spleen. (A) The top bar graph shows the total number splenocytes recovered at the end of the treatment while the bottom shows the number of CD3+ T cells obtained after gating within splenocytes for this population. The two panels in (B) are representative histograms of the CD3+ gated population while those in (C) show their respective CD4/CD8 profile. Values are expressed as mean ± S.E.M. and representative of four experiments, each involving 6 mice per group. *** p < 0.001.
mice (Fig. 3B). When considering the total number of each thymocyte subpopulation, only hand-stroked mice showed a significant increase in CD4+CD8+ double positive (DP) (p < 0.001), CD4+ single positive (SP) (p < 0.01), CD8+ SP cells (p < 0.001) compared to control (Fig. 3C), suggesting a possible effect of massage-like therapy on negative selection. Because brush-stroked mice showed no significant difference compared to control in any of the measures mentioned above, we continued our tests focusing on the effects of hand-massaged mice. Performing the same phenotypic analysis of the thymus on splenic cell populations we observed a similar enhancing effect of massage on T cell cellularity. The total count of post-Ficoll cells (mainly mononuclear cells) did not show any significant differences between hand-stroked and control (Fig. 4A, top panel). However, gating on the CD3+ cells (Fig. 4B) and converting percentages in absolute numbers (Fig. 4A, bottom panel) revealed an almost 100% increase (p < 0.001) of T cells in the hand-stroked compared to control, respectively. As for the thymus, the increase in T cell population was not skewed towards either CD4+ or CD8+ cell lineages (Fig. 4C).
Massage-like therapy reduces the noradrenergic tone of the thymus and spleen. Catecholamines released in lymphoid organs under the control of the central nervous system level are known regulators of the immune repertoire. To test the possibility that cathecolamines mediated the boosting effects of massage-like therapy in our tests, we measured noradrenaline concentration and the fluorescence intensity and density of noradrenergic nerve fibres in both thymus and spleen. Immunofluorescence analysis of thymus sections for catecholamine-containing nerve fibres showed a significant reduction in fluorescence intensity in both cortical and cortico-medullary junction areas of hand-stroked mice compared to control (Fig. 5A, right and left panels, respectively). This was consistent with the fact that large noradrenergic nerve plexuses predominate in the subcapsular cortex and corticomedullary junction, where more mature thymocytes reside34,35. Individual varicose nerve fibers branching from these plexuses terminate in the cortical and more rarely medullary parenchyma34,35. Quantitative analysis of both fluorescence intensity and nerve density confirmed these observations and showed a reduction of about 40% (p < 0.01) and 60% (p < 0.001), respectively, in hand-stroked tissue
图4。按摩式的抚摸接触可以增强成熟T细胞的功能。对C57BL/6雄性小鼠进行按摩样治疗（手抚摸接触）或不抚摸接触（对照）7天，然后分析其脾脏T细胞亚群。（A） 顶部条形图显示治疗结束时恢复的脾细胞总数，而底部则显示该人群脾细胞内门控后获得的CD3+T细胞数。（B）中的两个面板是CD3+门控群的代表性直方图，而（C）中的两个面板显示各自的CD4/CD8分布。数值以平均S.E.M.表示，代表四个实验，每组6只小鼠。***p<0.001。
小鼠（图3B）。当考虑到每个胸腺细胞亚群的总数时，与对照组（图3C）相比，只有手抚摸接触小鼠的CD4+CD8+双阳性（p<0.001）、CD4+单阳性（p<0.01）、CD8+SP细胞（p<0.001）显著增加（p<0.001），表明按摩疗法可能对阴性选择产生影响。由于在上述任何一项措施中，刷子抚摸接触小鼠与对照组相比均无显著性差异，因此我们继续以手按摩小鼠的效果为重点进行试验。对脾脏细胞群的胸腺进行同样的表型分析，我们观察到按摩对T细胞的增强作用类似。后Ficoll细胞（主要是单核细胞）的总数在手抚摸接触和对照组之间没有任何显著差异（图4A，顶部面板）。然而，对CD3+细胞（图4B）的选通和绝对数的转换百分比（图4A，底部面板）显示，与对照组相比，手抚摸接触的T细胞几乎增加了100%（p<0.001）。至于胸腺，T细胞数量的增加并没有偏向CD4+或CD8+细胞系（图4C）。
按摩式疗法可降低胸腺和脾脏的去甲肾上腺素能张力。在中枢神经系统水平的控制下，淋巴器官释放的儿茶酚胺是已知的免疫系统的调节因子。为了验证cathecolamines介导推拿疗法的促发作用，我们测定了胸腺和脾脏中去甲肾上腺素浓度、去甲肾上腺素能神经纤维的荧光强度和密度。含儿茶酚胺神经纤维的胸腺切片的免疫荧光分析显示，与对照组相比，手抚摸接触小鼠的皮质和皮质髓质连接区的荧光强度显著降低（分别为图5A、右面板和左面板）。这与大的去甲肾上腺素能神经丛主要分布在被膜下皮质和皮质髓质交界处的事实一致，那里有更成熟的胸腺细胞。从这些神经丛分支出来的个别静脉曲张神经纤维终止于皮质，很少出现髓质实质34,35。荧光强度和神经密度的定量分析证实了这些观察结果，手抚摸接触组织的荧光强度和神经密度分别降低了约40%（p<0.01）和60%（p<0.001）
Figure 5. Massage-like stroking reduces the thymic noradrenergic tone. C57BL/6 male mice were subjected to massage-like therapy (hand-stroked) or left untouched (control) for 7 days and then analysed for their noradrenergic innervation and tone in the thymus. The immunofluorescence micrographs in (A) show representative images of the noradrenergic nerves present in different sections of the thymus: C = cortex; T = trabeculae; M = medulla; CMJ = corticomedullary junction. The bar graphs in (B) show (from the top) intensity of nerve fibre fluorescence, density of the nerve fibres (%) and noradrenaline concentration (pg/mg) in tissue homogenates. Values of each bar column are expressed as the mean ± S.E.M. of n = 6 mice. ** p < 0.01; ***p < 0.001.
compared to control (Fig. 5B, top and middle panels, respectively). Finally, analysis of the noradrenaline content in tissue homogenates mirrored the immunofluorescence results and showed an overall reduction by about 50% (p < 0.01) of the noradrenaline levels in massaged mice compared to control (Fig. 5B, bottom panel). We performed the same analysis on the spleen and obtained similar results e.g. a reduction in the noradrenergic fibre fluorescence intensity (p < 0.01) and density (p < 0.01) (microphotographs in Fig. 6A and top and middle panels in 6B) and a significant reduction in noradrenaline levels in the spleen homogenates of hand-stroked mice compared to control (p < 0.05) (Fig. 6B, bottom panel).
Massage-like therapy does not change the activation profile of mature T cells. To assess if the boosting effects of massage-like therapy on T cell number were also accompanied by changes in their function, we performed some basic tests on T cell activation using plate-bound anti-CD3 plus anti-CD28 (anti-CD3/CD28) as stimulus. Stimulation of T cells from hand-stroked mice with suboptimal (0.1 μ g/ ml) or optimal (0.5 μ g/ml) of anti-CD3/CD28 caused a concentration dependent increase in CD25 and CD69 (markers of T cell activation) expression that was comparable with that observed in control cells (Fig. 7A). In addition, analysis of cytokine levels in the supernatants of stimulated T cells showed no significant difference in the levels of classical Th1 (IFN-γ , IL-2 and GM-CSF), Th2 (IL-10 and IL-13), or Th17 (IL-17) cytokines between the two groups (Fig. 7B).
Massage-like therapy reverses the immunosuppressive effects of hydrocortisone on thymocytes. Clinical evidences suggest that massage is beneficial for the treatment of immunodepletion following chemotherapy or in patients suffering immunodeficiency disorders. To recapitulate these findings we treated mice with hydrocortisone. This steroid is known to induce a transient immunosuppression through the induction of apoptosis of DP thymocytes (maximum at day 3/4 post injection) followed by recovery to its normal size and subset distribution a week following the treatment. At day 4 post-treatment, about 30% of the DP thymocytes survived in the control group treated with hydrocortisone (Fig. 8). Conversely, mice that received hydrocortisone and massage-like therapy showed a
图5。按摩式的抚摸接触可以降低胸腺去甲肾上腺素能的张力。C57BL/6雄性小鼠接受按摩式疗法（手抚摸接触）或不接触（对照）7天，然后分析其胸腺的去甲肾上腺素能神经分布和张力。（A）中的免疫荧光显微图显示了胸腺不同部位存在的去甲肾上腺素能神经的代表性图像：C=皮质；T=小梁；M=髓质；CMJ=皮质髓质交界处。（B）中的条形图显示（从顶部）组织均匀的神经纤维荧光强度、神经纤维密度（%）和去甲肾上腺素浓度（pg/mg）。每根杆状柱的值表示为n=6只小鼠的平均S.E.M。**p<0.01；***p<0.001。
与对照组相比（图5B，分别为顶部和中间面板）。最后，对组织匀浆中去甲肾上腺素含量的分析反映了免疫荧光结果，显示与对照组相比，按摩小鼠的去甲肾上腺素水平总体降低了约50%（p<0.01）（图5B，底部面板）。我们对脾脏进行了同样的分析，得到了相似的结果，例如，与手抚摸接触小鼠相比，去甲肾上腺素能纤维荧光强度（p<0.01）和密度（p<0.01）（图6A中的显微照片和6B中的上中面板）降低，并且脾脏匀浆中去甲肾上腺素水平显著降低对照组（p<0.05）（图6B，底部面板）。
按摩疗法不会改变成熟T细胞的激活模式。为了评估推拿疗法对T细胞数量的促进作用是否也伴随着其功能的改变，我们用板结合抗CD3加抗CD28（anti-CD3/CD28）作为刺激，对T细胞的活化进行了一些基本的实验。用次优（0.1 m g/ml）或最佳（0.5 mg/ml）或抗CD3/CD28刺激手抚摸接触小鼠的T细胞，导致CD25和CD69（T细胞活化标记物）表达的浓度依赖性增加，与在对照细胞中观察到的表达相当（图7A）。此外，对受刺激T细胞上清液中细胞因子水平的分析显示，两组之间的经典Th1（IFN-c、IL-2和GM-CSF）、Th2（IL-10和IL-13）或Th17（IL-17）细胞因子水平没有显著差异（图7B）。
推拿疗法逆转氢化可的松对胸腺细胞的免疫抑制作用。临床证据表明推拿有利于治疗化疗后的免疫缺陷或免疫缺陷患者。为了总结这些发现，我们用氢化可的松治疗小鼠。已知该类固醇通过诱导DP胸腺细胞凋亡（注射后3/4天最大）诱导短暂免疫抑制，然后在治疗后一周恢复其正常大小和亚群分布37,38。在治疗后第4天，用氢化可的松治疗的对照组中约30%的DP胸腺细胞存活（图8）。相反，接受氢化可的松和类似按摩疗法的小鼠显示
Figure 6. Massage-like stroking reduces the splenic noradrenergic tone. C57BL/6 male mice were subjected to massage-like therapy (hand-stroked) or left untouched (control) for 7 days and then analysed for their noradrenergic innervation and tone in the spleen. The immunofluorescence micrographs in (A) show representative images of the noradrenergic nerves present in different sections of the spleen. The bar graphs in (B) show (from the top) intensity of nerve fibre fluorescence, density of the nerve fibres (%) and noradrenaline concentration (pg/mg) in tissue homogenates. Values of each bar column are expressed as the mean ± S.E.M. of n = 6 mice. * p < 0.05; ** p < 0.01.
reduction to only 60% (p < 0.05 vs control hydrocortisone treated mice). Similar differences, although not significant, were observed at day 8 when the thymus had fully recovered (data not shown).
Discussion The main aim of this study was to investigate the effect of massage-like stroking on the immune system in an experimental model. Both human (finger-driven) and non-human (brush stroke-driven) stroking showed a trend towards an increase in T cell number in lymphoid organs. However, only hand-delivered-stroking showed a statistical significant difference compared to control, reinforcing the hypothesis that the application of a controlled pressure might not be the sole parameter that contributes to the therapeutic effect of massage17. Other factors like the warmth or consistency of the contact area (the fingers in our case) might play a role. Aiming to better understand the possible mechanism behind the observed differences in T cellularity, we first sought to investigate if this boosting action of massage on T cells was somehow linked to the hedonistic value of stroking and massaging on mood as it is often described for humans17. Our results suggested that this was not associated with significant difference in the levels of anxiety-like behaviour. There are many possible explanations for this discrepancy such as the length of the treatment itself not being enough to be “translated” into significant changes in anxiety-like behaviour (8 days as opposed to weeks) or, most likely, the absence of a modulatory effect of our massage-like paradigm on anxiety. In this regard it is interesting to note that studies addressing the handling of mice with tunnels have reported similar findings e.g. that handling does not always have an anxiolytic effect as this seems to be
图6。按摩式的抚摸接触可以降低网上的去甲肾上腺素能。C57BL/6雄性小鼠接受按摩疗法（手抚摸接触）或不接触（对照）7天，然后分析其脾内去甲肾上腺素能神经分布和张力。免疫荧光显微照片（A）显示了脾不同部位存在的去甲肾上腺素能神经的代表性图像。（B）中的条形图显示（从顶部）组织均匀的神经纤维荧光强度、神经纤维密度（%）和去甲肾上腺素浓度（pg/mg）。每根杆状柱的值表示为n=6只小鼠的平均S.E.M。*p<0.05；**p<0.01。
仅降低至60%（与对照组相比，p<0.05）。在胸腺完全恢复的第8天观察到类似的差异，尽管不显著（数据未显示）。
本研究的主要目的是在一个实验模型中探讨按摩式抚摸接触对免疫系统的影响。人（手指驱动）和非人（刷子驱动）的抚摸接触都显示出淋巴器官中T细胞数量增加的趋势。然而，与对照组相比，只有手动抚摸接触显示出统计学上的显著差异，这加强了以下假设：施加受控压力可能不是唯一有助于按摩治疗效果的参数17。其他因素，如接触区域的温度或一致性（在我们的例子中指）可能会起作用。为了更好地理解观察到的T细胞数量差异背后的可能机制，我们首先试图研究按摩对T细胞的这种促进作用是否与人们经常描述的抚摸接触和按摩情绪的享乐主义价值有关17。我们的结果表明，这与焦虑样行为水平的显著差异无关。对于这种差异有很多可能的解释，比如治疗本身的时间不足以“转化”为焦虑样行为的显著变化（8天而不是几周），或者，很可能是我们的按摩样范式对焦虑没有调节作用。在这方面，有意思的是，关于用隧道处理老鼠的研究报告了类似的发现，例如，治疗并不总是有缓解焦虑的效果，因为这似乎是
Figure 7. Massage-like stroking does not influence the activation profile of mature T cells. C57BL/6 male mice were subjected to massage-like therapy (hand-stroked) or left untouched (control) for 7 days and then analysed for their profile of T cell activation in vitro. (A) T cells were stimulated with the indicated concentrations of plate-bound anti-CD3 plus anti-CD28 for 16-18 hrs and then stained and analysed for their expression of CD25 and CD69 by FACS. (B) The plots show the levels of the indicated cytokines present in the supernatants of T cells stimulated with 0.5 μ g/ml of plate bound anti-CD3 plus anti-CD28 for 22-24 hours. Values are expressed as mean ± S.E.M. and representative of 2 experiments, each involving 6 mice per group.
dependent on the strain of the mice, the experimental test used and, last but not least, the social interaction with other mice. These surprising results contradict our initial hypothesis that the positive emotional response elicited by the massage would be ultimately linked to its immunomodulatory effect and prompted us to explore other possible mechanisms. Previous studies performed in humans have suggested that massage could either enhance vagal activity via stimulation of pressure receptors that ultimately signal the limbic system or decrease the release of norepinephrine in the blood stream causing an overall down regulation of sympathetic activity. Intriguingly, studies by our own lab and other research groups have shown sympathetic nerves that innervate lymphoid tissues as one of the major pathways by which the neuronal and immune system communicate to maintain body homeostasis. Most importantly, evidence suggests that this homeostatic cross-talk is responsible for the “processing of information” such as behavioural conditioning or changes of external environmental factors and its translation into specific immune responses. Our analysis of the noradrenergic tone present in the thymus and spleen of stroked mice supported these findings and showed a drastic reduction in nerve density and noradrenaline content when compared to control mice. Thymic noradrenergic nerves originate primarily from the superior cervical and stellate ganglia and enter the thymus with large blood vessels, ending into the capsule and interlobular septa. From these vascular nerve plexuses, smaller vascular plexuses diverge into the cortex. The spleen instead receives a rich supply of sympathetic nerves primarily from the superior mesenteric and celiac ganglionic plexuses and its noradrenergic innervation is distributed extensively to various parts of the spleen including capsule, trabeculae, red pulp, and white pulp. The functional significance of this
图7。按摩式抚摸接触不影响成熟T细胞的活化曲线。对C57BL/6雄性小鼠进行按摩样治疗（手抚摸接触）或不抚摸接触（对照）7天，然后分析其体外T细胞活化的情况。（A） 用指定浓度的板结合抗CD3和抗CD28刺激T细胞16-18小时，然后用流式细胞仪对其CD25和CD69的表达进行染色和分析。（B） 图中显示了用0.5m g/ml板结合抗CD3和抗CD28刺激T细胞上清22-24小时后所显示的细胞因子水平。数值以平均S.E.M.表示，代表两个实验，每组6只小鼠。
根据小鼠的压力反应，采用实验性试验，最后但并非最不重要的是，与其他mice的社会互动。这些令人惊讶的结果与我们最初的假设相矛盾，即按摩引起的积极情绪反应最终将与其免疫调节作用有关，并促使我们探索其他可能的机制。以前在人类身上进行的研究表明，按摩既可以通过刺激压力受体来增强迷走神经的活动，这些压力受体最终向边缘系统发出信号，也可以减少血液中去甲肾上腺素的释放，从而导致交感神经活动的全面下调。有趣的是，我们自己的实验室和其他研究小组的研究表明，交感神经支配淋巴组织是神经和免疫系统沟通以维持体内稳态的主要途径之一。最重要的是，有证据表明，这种稳态串扰负责“信息处理”，如行为调节或外部环境因素的变化，并将其转化为特定的免疫反应32.49。我们对中风小鼠胸腺和脾脏中存在的去甲肾上腺素能张力的分析支持了这些发现，并显示与对照组相比，神经密度和去甲肾上腺素含量显著降低。胸腺去甲肾上腺素能神经主要起源于颈上神经节和星状神经节，以大血管进入胸腺，最后进入包膜和小叶间隔。从这些血管神经丛，较小的血管神经丛分岔到皮质。脾脏主要接受来自肠系膜上和腹腔神经节丛的丰富交感神经，其去甲肾上腺素能神经分布广泛，分布于脾脏的各个部位，包括包膜、小梁、红髓和白髓。它的功能意义
Figure 8. Massage-like stroking reverts the immunosuppressive effect of hydrocortisone on CD4+CD8+ double positive T cells. C57BL/6 male mice received an intraperitoneal injection of hydrocortisone (2.5 mg/ mouse) or vehicle and then subjected to massage-like therapy (hand-stroked) or left untouched (control) for 7 days as indicated in the figure. At day 4 post hydrocortisone challenge T cell repertoire in the thymus was analysed. The panels in (A) show representative dot plots of the different subpopulations of thymocytes while (B) shows the total (left panel) or CD4+CD8+ double positive (right panel) thymocyte cell count. Values are expressed as mean ± S.E.M. and representative of 2 experiments, each involving 6 mice per group. * p < 0.05; ** p < 0.01; ***p < 0.001 vs vehicle control. § p < 0.05 vs hydrocortisone.
intricate network is to provide both potentiation and inhibition of immune functions. In our studies, the decreased noradrenergic tone of both thymus and spleen caused a significant increase in T cell cellularity as it has been observed in other settings through pharmacological or surgical reduction of the noradrenergic tone35. This boost in T cell number was not accompanied by changes in TCR response in vitro, as shown by our tests on mature T cell activation, supporting the idea that the immunomodulatory effects we observed in vivo might be due to the lymphoid organ microenvironment, rather than a direct effect at the level of T lymphocyte gene expression e.g. to their capacity to expand and proliferate.
How does massage-like stroking decrease noradrenergic tone? Although we have not fully addressed this question, there is growing evidence in the literature supporting the concept of an interactive network between cutaneous nerves, the neuroendocrine axis and the immune system. Based on these theories, the skin can be genuinely considered a neuroimmunoendocrine organ that controls a wide variety of functions through the peripheral sensory nervous system, the autonomous nervous system, as well as the central nervous system (for an in depth review on the topic see). This idea has been further substantiated by a recent novel study by Vrontou et al., that has identified unmyelinated C type sensory neurons that detect massage-like stroking on hairy skin in mice. These neurons, named MRGPRB4+ , exclusively innervate hairy skin and have been shown to be closely related to the C-LTMRs found in humans. Most strikingly, these fibres terminate in the substantia dorsal horn of the spinal cord with neurons that give projections to the insular cortex, an area of the brain concerned with wellbeing and emotion, but also shown to play a crucial role in the central autonomic network. Sympathetic nerve responses to insular cortical stimulation are mediated by synapses within the lateral hypothalamic area and ventrolateral medulla91, the brain structures linked with immunomodulation.
Notwithstanding the importance of fully investigating the cellular and molecular mechanisms behind the immunomodulatory function of massage, one of the major findings of this study is the confirmation in experimental animals of observations made in humans for the effectiveness of massage in the treatment of immunodeficiencies. The concept that massage has ‘recovering’ properties is well known in the field of sport medicine where it has been shown that massage has an important immunoregulatory function after strenuous exercise. More specifically, massage has been shown to favour recovery from the transient immunosuppressive state induced by exercise through release of more cells in the circulation and controlling the infiltration of inflammatory cells into the muscles.Similarly, there are some evidences that massage may support the recovery of immune function during periods of immunosuppression, counteracting the loss of T cells in patients suffering from cancer and HIV infection. Although peripherally comparable to these studies, our results support these findings and suggest that massage contribute to the maintenance of immunocompetence.
More investigations are required both at the experimental and clinical levels to fully appreciate the potential therapeutic application of massage therapy used as co-adjuvant to standard therapy. Nevertheless, we think our studies support innovative scientific views that stress the importance of considering the multiplicity of systems (system biology) that homeostatically regulate what is commonly known as “wellbeing”. Indeed, our results support the concept that mechanisms regulating homeostasis are of fundamental importance for a better understanding of the causes of immune and inflammatory “dis-ease”- from the old-french “aise” and the latin “adjacens” (living close by).
图8。推拿式抚摸接触可逆转氢化可的松对CD4+CD8+双阳性T细胞的免疫抑制作用。C57BL/6雄性小鼠腹腔注射氢化可的松（2.5毫克/小鼠）或载体，然后进行按摩式治疗（手抚摸接触）或保持7天未接触（对照），如图所示。在氢化可的松激发后的第4天，分析胸腺中的T细胞。（A）中的面板显示胸腺细胞不同亚群的典型点图，而（B）显示胸腺细胞总数（左面板）或CD4+CD8+双阳性（右面板）。数值以平均S.E.M.表示，代表两个实验，每组6只小鼠。与对照组相比，p<0.05；**p<0.01；**p<0.001。与氢化可的松相比，p<0.05。
复杂的网络是同时提供增强和抑制免疫功能。在我们的研究中，胸腺和脾脏的去甲肾上腺素能张力刺激的降低导致了T细胞数量的显著增加，在其他环境中通过药理或手术降低去甲肾上腺素能张力也观察到了这一点。这种T细胞数量的增加并没有伴随着体外TCR反应的变化，我们对成熟T细胞活化的实验表明，支持我们在体内观察到的免疫调节作用可能是由于淋巴器官微环境，而不是直接影响T淋巴细胞基因表达水平，例如扩张和增殖的能力。
抚摸接触之类的按摩是如何降低去甲肾上腺素刺激的？
尽管我们还没有完全解决这个问题，但越来越多的文献证据支持皮肤神经、神经内分泌轴和免疫系统之间的相互作用网络的概念。基于这些理论，皮肤可以被真正地认为是一种神经免疫内分泌器官，通过周围感觉神经系统、自主神经系统以及中枢神经系统控制着多种功能（关于该主题的深入综述，请参见）。Vrontou等人最近的一项新研究进一步证实了这一观点，该研究鉴定了无髓鞘的C型感觉神经元，这些神经元可以检测到老鼠多毛皮肤上的按摩样抚摸接触。这些被称为MRGPRB4+的神经元被证明与人类体内的C-LTMRs密切相关。最引人注目的是，这些纤维终止于脊髓的物质背角，神经元向岛叶皮质投射，岛叶皮质是大脑中与健康和情绪有关的区域，但也显示出在中枢自主神经网络中起着至关重要的作用。交感神经对岛状皮质刺激的反应是由下丘脑外侧区和延髓腹外侧区的突触介导的，延髓腹外侧区是与免疫调节相关的脑结构。
尽管充分研究推拿免疫调节功能背后的细胞和分子机制很重要，但本研究的主要发现之一是在实验动物身上证实了人类对推拿治疗免疫缺陷有效性的观察。推拿具有“恢复”功能的概念在运动医学领域已广为人知，它表明推拿在剧烈运动后具有重要的免疫调节功能。更具体地说，按摩被证明有助于通过释放循环中更多的细胞从运动引起的短暂免疫抑制状态中恢复，并控制炎症细胞向肌肉的渗透。有证据表明，按摩可能有助于免疫抑制期间免疫功能的恢复，抵消癌症和艾滋病毒感染患者T细胞的丢失。尽管与这些研究在外围可比，我们的结果支持这些发现，并表明按摩有助于维持免疫能力。
需要在实验和临床两个层面进行更多的研究，以充分认识按摩疗法作为标准疗法的辅助疗法的潜在治疗应用。尽管如此，我们认为我们的研究支持了创新的科学观点，强调了考虑系统多样性（系统生物学）的重要性，这些系统（系统生物学）可以动态调节通常所说的轻松与幸福感。事实上，我们的研究结果支持这样一个概念，即调节体内平衡的机制对于更好地理解来自古老的法语“aise”和拉丁语“adjacens”（）的免疫和炎症“dis ease”的原因具有根本重要性。
T淋巴细胞(T lymphocyte)
1简介
T淋巴细胞(T lymphocyte)简称T细胞，是由来源于骨髓的淋巴干细胞，在胸腺中分化、发育成熟后，通过淋巴和血液循环而分布到全身的免疫器官和组织中发挥免疫功能。
T淋巴细胞在体液免疫中的作用：大部分抗原要经过T淋巴细胞的呈递作用,即呈递抗原给B淋巴细胞,同时释放淋巴因子,增强B淋巴细胞的免疫效应，T淋巴细胞在细胞免疫中的作用：是细胞免疫发挥主要作用的淋巴细胞,受抗原刺激后大部分增殖分化为效应T细胞（通过与靶细胞密切接触,激活靶细胞内的溶酶体酶,使靶细胞裂解,释放抗原）,少部分增殖分化为记忆T细胞（对侵入的特定抗原有长期的记忆力,是进行二次免疫的重要细胞）
T淋巴细胞主要参与细胞免疫功能。根据淋巴细胞的发育成熟程度，T淋巴细胞又称胸腺依赖性淋巴细胞，其前体细胞依靠胸腺的发育成熟而成为功能性T淋巴细胞。占血液中淋巴细胞的50%-70%。它的寿命很长，可以存活数月甚至数年。T淋巴细胞主要参与淋巴细胞的循环利用。循环利用能增强免疫应答，传播记忆细胞，丰富淋巴组织，使抗原和抗原反应细胞在体内广泛接触。
2发育和分化
多能干细胞转变为淋巴样前体细胞(Lymphoid precursor)迁移至胸腺，在胸腺素的诱导下，经历一系列有序的分化过程，逐渐在胸腺发育成熟为识别各种抗原的T细胞库。T淋巴细胞进入胸腺后首先经历两个阶段：①早期T淋巴细胞发育阶段，即始祖CIM和CD8双阴性T淋巴细胞(double negative cell，DN)分化为CD4和CD8双阳性T细胞(double positive cell，DP)；②DP细胞分别经历阳性选择阶段和阴性选择阶段获取MHC限制性识别能力和对自身抗原的耐受性，发育为其表面标志为CD4或CD8的单阳性T细胞(single positive cell，SP)，迁往周围淋巴器官定居。
3分类
T淋巴细胞T细胞是相当复杂的不均一体、又不断在体内更新、在同一时间可以存在不同发育阶段或功能的亚群，但分类原则和命名比较混乱，尚未统一。按免疫应答中的功能不同，可将T细胞分成若干亚群，一致公认的有：
1、辅助性T细胞（Helper T cells,Th），具有协助体液免疫和细胞免疫的功能；
2、抑制性T细胞（Suppressor T cells,Ts），具有抑制细胞免疫及体液免疫的功能；
3、效应T细胞（Effector T cells,Te），具有释放淋巴因子的功能；
4、细胞毒性T细胞（Cytotoxic T cells,Tc），具有杀伤靶细胞的功能；
5、迟发性变态反应T细胞（Delayed type hypersensitivityT cells,Td），有参与Ⅳ型变态反应的作用；放大T细胞（Ta），可作用于Th和Ts，有扩大免疫效果的作用；
6、原始的或天然T细胞（Virgin or Natural T cells），他们和抗原接触后分化成效应T细胞和记忆T细胞；
7、记忆T细胞（Memory T cell,Tm），有记忆特异性抗原刺激的作用。T细胞在体内存活的时间可数月至数年。其记忆细胞存活的时间则更长。
其中，Th细胞又被称为CD4+细胞，因为其在表面表达CD4(cluster of differentiation 4）。通过与MHCⅡ（主要组织相容性复合体，major histocompatibility complex）递呈的多肽抗原反应被激活。MHCⅡ在抗原递呈细胞（antigen presenting cells,APCs）表面表达。一旦激活，可以分泌细胞因子，调节或者协助免疫反应。Tc细胞又名为CD8+细胞，其表面表达CD8.这类细胞可以通过MHCI 与抗原直接结合。
流式细胞分析仪FCM根据淋巴细胞表面标志的不同来检测各淋巴细胞亚群：
T淋巴细胞(T4噬菌体）淋巴细胞主要包括T淋巴细胞（CD3+），B淋巴细胞（CD19+），NK细胞（CD16+CD56+），
其中T淋巴细胞可进一步测定辅助/诱导T淋巴细胞（CD3+CD4+）、抑制/细胞毒T淋巴细胞（CD3+CD8+）、CD4+T细胞纯真亚群（CD4+CD45RA+/ CD4+CD45RA+62L+）和记忆亚群（CD4+CD45RA-/ CD4+CD45RO+）、功能亚群（CD28+）、激活亚群（CD38+、HLA-DR+）、凋亡亚群（CD95+）等。
T细胞按照功能和表面标志可以分成很多种类：
1、细胞毒T细胞（cytotoxic T cell）：消灭受感染的细胞。这些细胞的功能就像一个“杀手”或细胞毒素，因为它们可以对产生特殊抗原反应的目标细胞进行杀灭。细胞毒T细胞的主要表面标志是CD8，也被称为杀手T细胞。
2、辅助T细胞（helper T cell）在免疫反应中扮演中间过程的角色：它可以增生扩散来激活其它类型的产生直接免疫反应的免疫细胞。辅助T细胞的主要表面标志是CD4。 T细胞调控或“辅助”其它淋巴细胞发挥功能。它们是已知的HIV的目标细胞，在艾滋病发病时会急剧减少。
3、调节/抑制T细胞（regulatory/suppressor T cell）：负责调节机体免疫反应。通常起着维持自身耐受和避免免疫反应过度损伤机体的重要作用。调节/抑制T细胞有很多种，目前研究最活跃的是CD25+ CD4+ T细胞。
4、记忆T细胞 (memory T cell)：在再次免疫应答中起重要作用。但暂时没有发现记忆T细胞表面存在非常特异的表面标志物，相信随着研究的深入，人们对记忆T细胞将会有一个更深入的了解。
4表面标志
1、T细胞抗原受体(TCR)：TCR是T细胞识别外来抗原并与之结合的特异性受体，可表达于所有成熟的T细胞表面。大多数成熟T细胞(约95%)的TCR分子由α链和β链两条异二聚体肽链组成，小部分由γ、δ链组成。T细胞发育的过程中，编码α及β的基因决定TCR的高度多态性，不同的T细胞克隆有不同的TCR，能识别不同的抗原表位(决定簇)。TCR不能直接识别和结合游离的可溶性抗原，只识别经抗原提呈细胞加工并与MHC分子连接的抗原分子，TCR与抗原结合后不能直接活化T细胞，需依赖其邻近的CD3分子向细胞内传递活化信息，CD4和CD8协同和加强这一作用。
2、有丝分裂原受体：有丝分裂原可通过相应的受体激活静止期的淋巴细胞转化为淋巴母细胞，刺激多克隆T、B细胞增生、分化。主要包括植物血凝素(PHA)、刀豆蛋白A(ConA)、脂多糖(LPS)、美洲商陆丝裂原(PWM)、葡萄球菌A蛋白(SPA)和聚合鞭毛素等。
3、E受体(CD2)：存在于外周T细胞和胸腺细胞表面，能与绵羊红细胞结合，属黏附分子，为淋巴细胞功能相关抗原一2(LFA一2)，其配体是抗原提呈细胞和其他靶细胞上的LFA一3，促进T细胞与抗原提呈细胞的结合和相互作用，诱导活化。
4、CD3：存在于外周血T细胞和部分胸腺细胞表面。与TCR形成TCR-CD3复合体分子，将抗原信号传递到细胞内。
5、CD4和CD8：胸腺皮质前T细胞可同时表达CD4和CD8，外周血T细胞只表达其中一种分子。CD4与CD8分别与MHC-Ⅱ和MHC-1分子结合，稳定TCR与抗原肽一MHC分子复合物的结合，有助于激活信号传递。CD4分子是HIV进入靶细胞的主要受体，故HIV选择性破坏CD4+的细胞，导致获得性免疫缺陷。
6、CD5抗原：存在于所有外周血T细胞上，极小部分B细胞和慢性B淋巴细胞白血病细胞上表达CD5。抗CD5抗体能增强有丝分裂原对T细胞的增生反应。
7、CDll a/18：亦称LFA-1，配体为细胞问黏附分子-1(ICAM-1)和细胞间黏附分子-2(ICAM-2)，协同刺激信号，诱导T细胞活化。
8、CD28：其配体是抗原提呈细胞表面的B，分子，两者结合产生协同刺激信号，诱导T细胞活化。
9、HLA抗原：静息状态下的外周血T细胞只表达HLA-I类抗原，某些活化T细胞可同时表达I、Ⅱ类抗原。
lo、白细胞介素受体：T细胞在不同发育阶段表达不同的白细胞介素受体（IL-R)，如IL-1 R、IL一2R、IL一4R和IL-6R等。
免疫检测
T细胞分化抗原测定
【中文名称】
T细胞分化抗原测定
【概述】
T细胞膜表面有100多种特异性抗原，现已制备了多种单克隆抗体，WHO（1986）统称为白细胞分化抗原（cluster differentiation，CD）。例如CD3代表总T细胞，CD4代表T辅助细胞（TH），CD8代表T细胞毒性细胞（TC）等。应用这些细胞的单克隆抗体与T细胞表面抗原结合后，再与荧光标记二抗（兔或羊抗鼠IgG）反应，在荧光显微镜下或流式细胞仪中计数CD的百分率。
【参考值】
免疫荧光法（IFA）：CD3为63.1%±10.8%；CD4（TH）为42.8%±9.5%；CD8（TS）为19.6%±5.9%；CD4/CD8（TH/TS）为（2.2±0.7）/1。流式细胞术：CD3为61%～85%；CD4为28%～58%；CD8为19%～48%；CD4/CD8为0.9～2.0/1。
【临床意义】
①CD3降低：见于自身免疫性疾病，如SLE、类风湿关节炎等。
②CD4降低：见于恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷症、艾滋病、应用免疫抑制剂者。
③CD8减低：见于自身免疫性疾病或变态反应性疾病。
④CD4/CD8比值增高：见于恶性肿瘤、自身免疫性疾病、病毒性感染、变态反应等；CD4/CD8比值减低：见于艾滋病（常<0.5）。
⑤监测器官移植排斥反应时CD4/CD8比值增高预示可能发生排斥反应。
⑥CD3、CD4、CD8较高且有CD1、CD2、CD5、CD7增高则可能为T细胞型急性淋巴细胞白血病。
5生物学功能编辑
T细胞是淋巴细胞的主要组分，它具有多种生物学功能，如直接杀伤靶细胞，辅助或抑制B细胞产生抗体，对特异性抗原和促有丝分裂原的应答反应以及产生细胞因子等，是身体中为抵御疾病感染、肿瘤而形成的英勇斗士。T细胞产生的免疫应答是细胞免疫，细胞免疫的效应形式主要有两种：与靶细胞特异性结合，破坏靶细胞膜，直接杀伤靶细胞；另一种是释放淋巴因子，最终使免疫效应扩大和增强。
T细胞，是由胸腺内的淋巴干细胞分化而成，是淋巴细胞中数量最多，功能最复杂的一类细胞。按其功能可分为三个亚群：辅助性T细胞、抑制性T细胞和细胞毒性T细胞。它们的正常功能对人类抵御疾病非常重要。到目前为止，有关T细胞的演化以及它与癌症的研究取得了不少进展。特别是21世纪初人类开始的生命方舟计划对于T细胞的演化以及它与癌症的研究更是取得了突破性的进展。
造血干细胞又称多能干细胞，是存在于造血组织中的一群原始造血细胞。其最大特点是能自身复制和分化，通常处于静止期，当机体需要时，分裂增殖，一部分分化为定向干细胞，受到一定激素刺激后，进一步分化为各系统的血细胞系。其中淋巴干细胞进一步分化有两条途径。一些干细胞迁移到胸腺内，在胸腺激素影响下，大量增殖分化成为成熟淋巴细胞的一个亚群，被称之为T淋巴细胞。T细胞的“T”字，是采用“胸腺”的拉丁文第一个字母命名的。第二个细胞群在类似法氏囊的器官或组织内受激素作用，成熟并分化为淋巴细胞的另一个亚群，被称为B淋巴细胞。B细胞的“B”字，是采用“囊”的拉丁文第一个字母命名的。法氏囊是鸟类特有的结构，位于泄殖腔后上方，囊壁充满淋巴组织。人和哺乳动物无法氏囊，其类似的结构可能是骨髓或肠道中的淋巴组织（集合淋巴结，阑尾等），亦有法氏囊作用。
T细胞不产生抗体，而是直接起作用。所以T细胞的免疫作用叫作“细胞免疫”。B细胞是通过产生抗体起作用。抗体存在于体液里，所以B细胞的免疫作用叫作“体液免疫”。大多数抗原物质在刺激B细胞形成抗体过程中；需T细胞的协助。在某些情况下，T细胞亦有抑制B细胞的作用。如果抑制性T细胞因受感染、辐射、胸腺功能紊乱等因素的影响而功能降低时，B细胞因失去T细胞的控制而功能亢进，就可能产生大量自身抗体，并引起各种自身免疫病。例如系统性红斑狼疮，慢性活动性肝炎、类风湿性关节炎等。同样，在某些情况下，B细胞也可控制或增强T细胞的功能。由此可见，身体中各类免疫反应，不论是细胞免疫还是体液免液，共同构成了一个极为精细、复杂而完善的防卫体系。
6抗癌研究编辑
2013年1月初，日本科学家首次培育出能够杀死癌细胞的T细胞。他们表示这一研究突破为直接将T细胞注入癌症患者体内，用以对抗癌症铺平了道路。实际上，人体可天然产生T细胞，但数量较少。成功培育T细胞让将这种细胞大量注入患者体内，以增强免疫系统成为一种可能。
为了培育这种细胞，他们首先对专门杀死一种确定癌细胞的T淋巴细胞进行“再编程”，使其变成另一种细胞，被称之为“诱导性多功能干细胞”，诱导性多功能干细胞随后发育成功能齐备的T淋巴细胞。诱导性多功能干细胞发育而成的T淋巴细胞未来可充当一种潜在的癌症治疗手段。
日本科学家将专门对抗一种皮肤癌的T淋巴细胞培育成诱导性多功能干细胞，方式是将这种淋巴细胞暴露在“山中因子”环境下。山中因子是一组化合物，能够让细胞退回到“非专业性”阶段。在实验室，研究人员将诱导性多功能干细胞变成T淋巴细胞。与最初的T淋巴细胞一样，此时的T淋巴细胞也专功同样的皮肤癌。它们的基因构成与最初的T淋巴细胞相同，能够表达癌症特异性受体。研究发现这种新型T淋巴细胞非常活跃，可以产生一种抗癌化合物。
川本浩博士表示：“我们成功培育出具有特定抗原的T细胞，方式是培育诱导性多功能干细胞，而后让它们变成功能性T细胞。下一步工作是研究这些T细胞到底是具有选择性地杀死癌细胞还是连同其他细胞一起杀死。如果选择性杀死癌细胞，这些T细胞便可直接注入患者体内，用于对抗癌症。在不太遥远的将来，我们便可为癌症患者实施这种疗法。”研究发现刊登在《干细胞》杂志上。[1]
7免疫应答
1．感应阶段：
T细胞
⑴靶细胞对内源性抗原的加工、处理及递呈
⑵CD8+T细胞对抗原的识别（双识别）
↗CDR1和CDR2识别MHC-Ⅰ类分子
TCR→CDR3识别抗原肽的T细胞表位
MHC限制性
2．反应阶段：
⑴T细胞的充分活化需要双信号
第一信号：抗原特异性信号
TCR — 抗原肽-MHC-Ⅰ类分子复合物
CD8 — MHC-Ⅰ类分子
第二信号：协同刺激信号
CD28 — B7（CD80、CD86)
CD2（LFA-2）— CD58（LFA-3)
LFA-1 — ICAM-1
⑵活化CTL细胞增殖、分化为效应性CTL 细胞的过程中需要Th1细胞辅助。
⑶在CTL细胞的分化过程中也有记忆性
CTL细胞形成（疫苗接种的基础）。
3．效应阶段：
⑴CTL杀伤靶细胞的过程：
特异性识别与结合阶段
致死性打击阶段
靶细胞的裂解
⑵CTL杀伤靶细胞的特点：
具有明显的特异性杀伤作用
对靶细胞的杀伤受MHC-Ⅰ类分子的限制
在短时间具有连续杀伤靶细胞的功能
3)CTL杀伤靶细胞的机制：
穿孔素
颗粒酶系统
Fas/FasL介导的细胞凋亡
8分化编辑
多能干细胞转变为淋巴样前体细胞(Lymphoid precursor)迁移至胸腺，在胸腺素的诱导下，经历一系列有序的分化过程，逐渐在胸腺发育成熟为识别各种抗原的T细胞库。T淋巴细胞进入胸腺后首先经历两个阶段：①早期T淋巴细胞发育阶段，即始祖CIM和CD8双阴性T淋巴细胞(double negative cell，DN)分化为CD4和CD8双阳性T细胞(double positive cell，DP)；②DP细胞分别经历阳性选择阶段和阴性选择阶段获取MHC限制性识别能力和对自身抗原的耐受性，发育为其表面标志为CD4或CD8的单阳性T细胞(single positive cell，SP)，迁往周围淋巴器官定居。
9亚群编辑
应用CD4和CD8单克隆抗体可将外周淋巴器官或外周血中的T细胞分为CD4 CD8-和CD4-CD8 两个主要的亚群。每个亚群按照某些表面标志和功能又可分为不同的功能亚群。一CD4阳性细胞群
⒈ 应用Th细胞克隆培养技术和细胞因子产生的不同，已发现小鼠CD4阳性细胞群是一个不均一的亚群，可分为Th1和Th2，主要区别见表7-6。
Th1细胞能合成IL-2、IFN-γ、，LT、IL-3、TNF-α和GM-CSF，但不能合成IL-4、ⅡL-5、IL-6、IL-10和IL-13；而Th2能合成TNF-α、IL-3、GM-CSF、IL-4、IL-5、IL-6、ⅡL-10（细胞因子合成抑制因子，CSIF）和IL-13，不能合成IL-2、IFN-γ和LT。此外Th1和Th2都能分泌三巨噬细胞炎症蛋白和前脑啡肽原。Th1和Th2都能辅助B合成抗体，但辅助的强度和性质不同。体外实验表明，IL-4明显促进B细胞合成和分泌IgE，如使LPS刺激小鼠B细胞合成IgE能力增强10-100倍。少量IFN-γ能完全阴断IL-4对IgE合成的促进作用。Th2分泌IL-4对IgE合成有正调节作用，而Th1分泌IFN-γ则起负调节作用。此外，Th2通过分泌IL-4和IL-5辅助IgA合成，分泌IL-10（CSIF），抑制Th1细胞合成细胞因子，而Th1对IgG1合成则有抑制作用，但辅助其它几种类型Ig的合成。由于Th1和Th2合成淋巴因子的种类不同，因而介导不同的超敏反应。IL-3和IL-4均能促进肥大细胞增殖，且相互有协同作用，IL-5除辅助B细胞合成IgA外，还能刺激骨髓嗜酸性粒细胞的集落形成，因而Th2与速发型超敏反应关系密切。Th1通过产生IFN-γ阻断IgE合成，对速发型超敏反应有抑制作用。Th1与迟发型超敏反应有关，可能与IL-2、IFN-γ等对巨噬细胞活化和促进CTL分化作用有关，此外LT也有直接杀伤靶细胞作用。两群Th克隆均能诱导抗原提呈细胞（APC）表达MHCⅡ类抗原，Th1通过IFN-γ诱导Mφ表达Ia抗原，而Th2通过IL-4对Mφ和B细胞Ia抗原表达起正调节作用。在人类Th1和Th2细胞亚群尚未得到最后证实。从发表资料来看，CD4 CD45RO前体细胞向Th2效应细胞分化，而IFN-γ则对前体细胞向Th2分化过程起抑制作用，因此IL-4和IFN-γ在决定CD4 CD45RO 前体细胞向Th1或Th2分化过程中起着重要的调节作用。人T细胞经多克隆活化后，在CD4阳性细胞中IL-4mRNA阳性比便不到5%，而60%的CD4 细胞有IFN-γ和IL-2mRNA的转录。
⒉抑制细胞诱导亚群和辅助细胞诱导亚群 应用CD45RA、CD45RO、CD29和CD31单克隆抗体可将CD4阳性细胞群分为抑制细胞诱导亚群和辅助细胞诱导亚群。
⑴CD31：发现CD31是一种新的、激活后表达水平不发生明显变化的抑制细胞诱导亚群的表面标记。CD31是一种血小板-内皮细胞胞粘附分子（PECAMgpⅡa），分子量为140kDa，其结构属于免疫球蛋白超家族成员。从外周血新鲜分离的CD4细胞中，CD31McAb主要与CD45RA亚群反应，对B细胞合成IgG辅助作用不明显，对ConA和自身MHC（自身MLR）反应较为敏感；而CD31-的CD4细胞群中，发现有大量辅助B细胞合成IgG的活性和对某些抗原刺激的回忆反应。CD45RA 的CD4细胞大激活后，尽管细胞表面丢失CD45RA，但表面CD31的表达仍不发生明显变化；而CD45RO CD45RA-的CD4细胞激活后不能获得CD31表达。由于CD31在CD4细胞激活后仍不变化，对于鉴别抑制细胞诱导亚群和辅助细胞诱导亚群是一种有用的标志。
许多粘附分子如CD11a/CD18(LFA-1)LFA-3,CD2和CD29（VLAβ链）主要表达在CD45RO T细胞表面。而CD31则表达在CD45RA CD4细胞表面。抗CD31McAb作用于naiveT细胞能触发其VLA-4介导的粘附作用。内皮细胞表面CD31及其配体与T细胞表面CD31及其配体相互作用很可能触发整合素介导的粘附作用。CD31如何参与CD45RA CD4 T细胞功能以及诱导抑制性T细胞产生还有待进一步研究。
⑵CD45：CD45为异构型分子。CD45细胞膜外部多肽链可由A、B和C三种外显子编码。人幼稚T细胞只表达被抗CD45RA识别的CD45A型；记忆T细胞不表达任何A、B、C外显子产物而被抗CD45RO识别。抗CD45RA和抗CD45RO识别的都是休止型细胞，抗CD45RO所识别的记忆T细胞往往也可低水平表达一系列活化表面标记，如CD25、MHCⅡ类抗原、CD54、CD26等，提示这类细胞可能新近被激活过，由此推论记忆T细胞可能是由于持久性抗原或交叉抗原的低剂量、持续刺激得以维持其长时间存活。体外实验观察到细胞活化后见有从CD45RA向CD45RO的单向性转变，这与幼稚T细胞向记忆T细胞分化相平行。
⑶自身混合淋巴细胞反应：外周血B细胞和单核细胞等非T细胞在体外培养时能诱导某些自身T细胞发生增殖反应，称为自身混合淋巴细胞的应（autologousmixed lymphocytereactionAMLR）。这一部分T细胞称为自身反应性T细胞。作为刺激细胞的B细胞和单核细胞主要是通过其细胞表面的MHCⅡ类抗原来刺激自身反应性T细胞，在体外培养时加入抗MHCⅡ类抗原的抗体可阻断AMLR。可能是机体的一种免疫调节机制。
二CD8阳性细胞群
根据CD28阳性或阴性可将CD8 细胞分为细胞毒性T细胞（CD8 CD28+）和抑制性T细胞（CD8 CD28-）。CD28McAb能与60-80%T细胞发生反应，包括全部CD4细胞和部分CD8细胞。
⒈在人类CTL表型为CD3 CD4-8 CD28。小鼠CTL表型为Thy-1 、Lyt-1 、Lyt-2 /Lyt-3。
⑴CTL的分化：静止的CTL以前体细胞（precursor）（CTL-P）形式存在，外来抗原进入机体被抗原提呈细胞（APC）加工处理，形成外来抗原与APC自身MHcI类抗原的复合物，被相应CTL克隆细胞膜表面TCR/CD3所识别，抗原刺激信号和APC释放IL-1共同存在的条件下，CTL-p被活化，并表达IL-2R、IL-4R、IL-6R等多种细胞因子受体，在IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ等细胞因子诱导下，迅速增殖，并分化为成熟的效应杀伤性T细胞（effectorCTL）。CTL具有识别抗原的特异性，即能杀伤具有特定的外来抗原（如病毒感染靶细胞膜表面的病毒抗原）与自身MHcI类抗原结合的复合物的靶细胞。有关CTL杀伤靶细胞受到MHCI类抗原的限制，从肿瘤组织周围分离获得的CTL称为肿瘤浸润淋巴细胞（tumorinfiltratinglymphocyteTIL）。TIL在体外加IL-2培养后，具有很高的杀伤肿瘤作用，已用于临床的肿瘤治疗。
⑵CTL的识别机制：多种粘附分子参与CTL对靶细胞的识别和粘附，主要有：①LFA-1/ICAM-1、ICAM-2、ICAM-3，可溶性ICAM-1（sICAM-1）可抑制CTL杀伤肿瘤细胞；②CD2/LFA-3（CD58），抗CD2McAb或抗CD58McAb均可抑制CTL效应细胞对靶细胞的杀伤；③CD8/MHcI类抗原的非多态性结构域。
⑶CTL的杀伤机制：TCL杀伤靶细胞的机理认为主要通过释放多种的介质和因子介导的。
①穿孔素（perforin）：又称成孔蛋白（pore-fomingprotein,PFP）、C9相关蛋白（C9relatedprotein）或溶细胞素（cytolysin），贮存于电子稠密胞浆颗粒（electron-densecytoplasmicgranules），成熟的穿孔素分子由534个氨基酸残基组成，分子量为56-75kDa，IP为6.4，穿孔素分子中央部位170-390之间的氨基酸序列与C9328-560氨酸酸序列约有20%同源性，这个区域与穿孔素和C9的多聚化和以管状形式插入到细胞膜有关。在杀伤相时，CTL细胞脱颗粒，穿孔素从颗粒中释放，在Ca2 存在下，插入靶细胞膜上，并多聚化形成管状的多聚穿孔素（polyperforin），约含12-16个穿孔素分子，分子量可达1000kDa。多聚穿孔素在靶细胞膜上形成穿膜的管状结构，内径平均16nm。这种异常的通道使Na 、水分进入靶细胞内，K 及大分子物质（如蛋白质）从靶细胞内流出，改变细胞渗透压，最终导致细胞溶解。此过程与补体介导的溶细胞过程类似，溶解细胞过程比较迅速。CTL本身可能释放A型硫酸软骨素蛋白聚糖（proteoglycansofchondroitinsulphateAtype）、硫酸软骨素A限制因子（homologousrestrictionfactor,HRF），因此可避免穿孔素对CTL自身细胞的攻击。
②丝氨酸酯酶（serineestersse）：活化CTL释放多种丝氨酸酯酶，如CTLA-1（又称CCP1或granzymeB）、CTLA-3（又称H因子或granzymeA），其作用可能类似补体激活过程中的酯酶作用，通过活化穿孔素而促进杀伤作用。
T淋巴细胞⒉Ts和Ts亚群 抑制性T细胞（suppressorTlymphocyteTs）对免疫应答有重要的负调节功能，抑制性T细胞功能的异常，常与T自身免疫性疾病、第I型超敏反应等疾病发生有关。
⑴抑制性T细胞的证实：绵羊红细胞（sheepredbloodcellSRBC）对于小鼠是良好的免疫原，合适剂量的SRBC可诱导小鼠产生高效价的抗SRBC抗体。当过高剂量SRBC免疫小鼠时，则抗体合成水平反而明显下降，称为高剂量免疫耐受。动物实验研究发现，将高剂量免疫耐受小鼠脾细胞转移到免疫原剂量刺激的小鼠体内时，则小鼠抗体应答水平明显下降。如高剂量免疫耐受小鼠脾细胞经抗Thy-1和补体处理后再转移到免疫原剂量免疫的小鼠体内，则高剂量免疫耐受小鼠脾细胞的抑制作用消失。实验证明了在高剂量免疫耐受小鼠的脾细胞中存在有抑制作用的T细胞。
这种抑制细胞的表型为CD3 CD4-CD8 （小鼠CD8单抗常用Lyt-2）。人的抑制性T细胞表型为CD3 CD4-CD8 CD28-。Ts细胞不仅对B细胞合成和分泌抗体有抑制作用，而且对Th辅助作用、迟发型超敏反应以及Tc介导的细胞毒作用都有负调节作用。
⑵Ts细胞的亚群：Ts细胞还可分为Ts1、Ts2和Ts3不同亚群，分别起着诱导抑制、转导抑制和发挥抑制效应的作用。它们之间相互作用的确切机理还不十分清楚，可能是通过释放可溶性介质相互作用的。Ts1（Tsi，抗原特异性抑制性T细胞）分泌TsF1（TsiF，抑制诱导因子）→作用于Ts2（Tst，抑制转导细胞），分泌TsF2（TstF）→作用于Ts3（Tse，抑制效应细胞），分泌Ts3F（TseF），作用于Th细胞，通过对Th的抑制作用，从而对各种免疫功能起负调节作用。Ts细胞群具有高度异质性，除Ts1、Ts2、Ts3亚群外，还有一群反抑制性T细胞亚群（contra-suppressorTcel，Tcsl）。Tcs活化后分泌反抑制性T细胞因子TcsF，直接作用于Th细胞，解除Ts细胞的抑制作用，使Th细胞恢复辅助活性。
神经递质编辑词条
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神经递质（英文neurotransmitter）在突触传递中是担当“信使”的特定化学物质，简称递质。随着神经生物学的发展，陆续在神经系统中发现了大量神经活性物质。
| 中文名神经递质传递突触传递属于生物学 | 外文名neurotransmitter作用信使简称递质 |
1基本简介编辑
在中枢神经系统（CNS）中，突触传递最重要的方式是神经化学传递。神经递质由突触前膜释放后立即与相应的突触后膜受体结合，产生突触去极化电位或超极化电位，导致突触后神经兴奋性升高或降低。神经递质的作用可通过两个途径中止：一是再回收抑制，即通过突触前载体的作用将突触间隙中多余的神经递质回收至突触前神经元并贮存于囊泡；另一途径是酶解，如以多巴胺（DA）为例，它经由位于线粒体的单胺氧化酶（MAO）和位于细胞质的儿茶酚胺邻位甲基转移酶（COMT）的作用被代谢和失活。
2符合标准编辑
神经递质必须符合以下标准：
1.在神经元内合成。
2.贮存在突触前神经元并在去极化时释放一定浓度（具有显著生理效应）的量。
神经递质
3.当作为药物应用时，外源分子类似内源性神经递质。
4.神经元或突触间隙的机制是对神经递质的清除或失活。如不符合全部标准，称为“拟订的神经递质”。
3递质分类编辑
脑内神经递质分为四类，即生物原胺类、氨基酸类、肽类、其它类。生物原胺类神经递质是最先发现的一类，包括：多巴胺（DA）、去甲肾上腺素（NE）、肾上腺素（E）、5-羟色胺（5-HT）也称（血清素）。氨基酸类神经递质包括：γ-氨基丁酸（GABA）、甘氨酸、谷氨酸、组胺、乙酰胆碱（Ach）。肽类神经递质分为：内源性阿片肽、P物质、神经加压素、胆囊收缩素（CCK）、生长抑素、血管加压素和缩宫素、神经肽y。其它神经递质分为：核苷酸类、花生酸碱、阿南德酰胺、sigma受体（σ受体）。其它类：一氧化氮就被普遍认为是神经递质，它不以胞吐的方式释放，而是凭借其溶脂性穿过细胞膜，通过化学反应发挥作用并灭活。在突触可塑性变化、长时程增强效应中起到逆行信使的作用。
重要的神经递质和调质有：
黑质就被称为“神经递质”
①乙酰胆碱。最早被鉴定的递质。脊椎动物骨骼肌神经肌肉接头、某些低等动物如软体、环节和扁形动物等的运动肌接头等，都是以乙酰胆碱为兴奋性递质。脊椎动物副交感神经与效应器之间的递质也是乙酰胆碱，但有的是兴奋性的（如在消化道），有的是抑制性的（如在心肌）。中国生理学家张锡钧和J.H.加德姆（1932）所开发的以蛙腹直肌标本定量测定乙酰胆碱的方法，对乙酰胆碱的研究起了重要作用，至今仍有应用价值。
②儿茶酚胺。包括去甲肾上腺素（NE）、肾上腺素(E)和多巴胺（DA）。交感神经节细胞与效应器之间的接头是以去甲肾上腺素为递质。
③5-羟色胺（5-HT）。5-羟色胺神经元主要集中在脑桥的中缝核群中，一般是抑制性的，但也有兴奋性的。中国一些学者的研究表明，在针刺镇痛中5-羟色胺起着重要作用。
④氨基酸递质。被确定为递质的有谷氨酸（Glu）、γ-氨基丁酸（GABA）和甘氨酸（Gly）。谷氨酸是甲壳类神经肌肉接头的递质。γ氨基丁酸首先是在螯虾螯肢开肌与抑制性神经纤维所形成的接头处发现的递质。后来证明γ-氨基丁酸也是中枢的抑制递质。以甘氨酸为递质的突触主要分布在脊髓中，也是抑制性递质。
⑤多肽类神经活性物质。发现多种分子较小的肽具有神经活性，神经元中含有一些小肽，虽然还不能肯定它们是递质。如在消化道中存在的胰岛素、胰高血糖素和胆囊收缩素等都被证明也含于中枢神经元中.
4符合条件编辑
突触传递是通过突触前膜释放化学递质来完成的（非突触性化学传递的情况也是如此）。一个化学物质被确认为神经递质，应符合以下条件：
①在突触前神经元内具有全盛递质的前体物质和合成酶系，能够合成这一递质；
②递质贮存于突触小泡以防止被胞浆内其它酶系所破坏，当兴奋冲动抵达神经末梢时，小泡内递质能释放入突触间隙；
③递质通过突触间隙作用于突触后膜的特殊受体，发挥其生理作用，用电生理微电泳方法将递质离子施加到神经元或效应细胞旁，以模拟递质释放过程能引致相同的生理效应；
④存在使这一递质失活的酶或其他环节（摄取回收）；
⑤用递质拟似剂或受体阻断剂能加强或阻断这一递质的突触传递作用。在神经系统内存在许多化学物质，但不一定都是神经递质，只有符合或基本上符合以上条件的化学物质才能认为它是神经递质。关于神经递质，首先是在外周迷走神经对心脏抑制作用的环节上发现的。
5外周神经编辑
胆碱能
乙酰胆碱在蛙心灌注实验中观察到，刺激迷走神经时蛙心活动受到抑制，如将灌流液转移到另一蛙心制备中去，也可引致后一个蛙心的抑制。显然在迷走神经兴奋时，有化学物质释放出来，从而导致心脏活动的抑制。后来证明这一化学物质是乙酰胆碱，乙酰胆碱是迷走神经释放的递质。以后在许多其他器官中（例如胃肠、膀胱、颌下腺等），刺激其副交感神经也可在灌注液中找到乙酰胆碱。由此认为，副交感神经节后纤维都是释放乙酰胆碱作为递质的。释放乙酰胆碱作为递质的神经纤维，称为胆碱能纤维。
自主神经系统神经末梢的化学传递
人进行了上颈交感神经节的灌流，见到刺激节前纤维可以灌流液中获得乙酰胆碱，所以节前纤维的递质也是乙酰胆碱。现已明确躯体运动纤维也是胆碱能纤维。节前纤维和运动神经纤维所释放的乙酰胆碱的作用，与菸碱样作用（N样作用）；而副交感神经节后纤维所释放的乙酰胆碱的作用，也毒蕈碱的药理作用相同，称为毒蕈碱样作用（M样作用）。
去甲肾上腺素能
去甲肾上腺素交感神经节后纤维的递质比较复杂。本世纪初，有人见到肾上腺素对效应器的广泛作用与交感神经的作用极为相似，因此设想交感神经可能是通过末梢释放肾上腺素而对效应器起作用的。后来，在猫的实验中观察到，刺激支配尾巴的交感神经可以引致尾巴上毛的竖立和血管收缩，同时该动物的去神经支配的心脏活动加速；如果将自尾巴回流的静脉结扎，再刺激这一交感神经就只能引致尾巴上毛的竖立和血管收缩，却不能引致心脏活动的加速。由此设想，支配尾巴的交感神经末梢能释放一种化学物质，由静脉回流于心脏，这种物质在当时称为交感素。交感素比乙酰胆碱的性质稳定，当有大量释放时不易破坏，在一般情况下有可能经血液循环作用于较为远隔的效应器官。后来，在刺激支配其他器官的交感神经时，均证明静脉血中出现交感素。曾有人指出，交感素是去甲肾上腺素和肾上腺素的混合物，而主要是去甲肾上腺素。现已明确，在高等动物中由交感神经节后纤维释放的递质仅是去甲肾腺上素，而不含肾上腺素；因为在神经末梢只能合成去甲肾上腺素，而不能进一步合成肾上腺素，由于末梢中不含合成肾上腺素所必需的苯乙醇胺氮位甲基移位酶。释放去甲肾上腺素作为递质的神经纤维，称为肾上腺素能纤维。但是，不是所有的交感神经节后纤维都是肾上腺素能纤维，像支配汗腺的交感神经和骨骼肌的交感舒血管纤维却是胆碱能纤维。
嘌呤类和肽类递质
嘌呤类和肽类递质自主神经的节后纤维除胆三能和肾上腺素能纤维外，还有第三类纤维。第三类纤维末梢释放的递质是嘌呤类和肽类化学物质。有人在实验中观察到，刺激这类神经时实验标本灌流液中可以找到三磷酸腺苷及其分解产物；而三磷酸腺苷对有肠肌的作用与这类神经的作用极相似，两者均可引致肠肌的舒张和肠肌细胞电位的超极化。因此认为这类神经末梢释放的递质是三磷酸腺苷，是一种腺嘌呤化合物。但也有人认为这类神经释放的递质是肽类化合物，因为免疫细胞化学的研究证实自主神经某些纤维末梢的大颗粒囊泡中含有血管活性肠肽，刺激迷走神经时能引致血管活性肠肽的释放。血管活性肠肽能使胃肠平滑肌舒张，胃的容受性舒张可能就是由于迷走神经节后纤维释放血管活性肠肽递质而实现的。第三类纤维是非胆碱能和非肾上腺素能纤维，主要存在于胃肠，其神经元细胞体位于壁内神经丛中；在胃肠上部它接受副交感神经节前纤维的支配。
6中枢神经编辑
乙酰胆碱闰绍细胞（Renshaw cell）是脊髓前角内的一种神经元，它接受前角运动神经元轴突侧支的支配，它的活动转而反馈抑制前角运动神经元的活动。前角运动神经元支配骨骼肌的接头处递质为乙酰胆碱，则其轴突侧支与闰绐细胞发生突触联系，也必定释放乙酰胆碱作为递质。用电生理微电泳法将乙酰胆碱作用于闰绍细胞，确能引致其放电；用N型受体阻断剂后，乙酰胆碱的兴奋作用即被阻断，说明这一突触联系的乙酰胆碱作用与神经肌接头处一样都是N样作用.
脊髓前角运动神经元与闰绍细胞的反馈联系
位于丘脑后部腹侧的特异感觉投射神经元是胆碱能神经元，它们和相应的皮层感觉区神经元形成的突触是以乙酰胆碱为递质的。例如，刺激视神经时，枕叶皮层17区等处的乙酰胆碱释放增多。
脑干网状结构上行激动系统（参见第三节）的各个环节似乎都存在乙酰胆碱递质。例如，脑干脑状结构内某些神经元对乙酰胆碱敏感；刺激中脑网状结构使脑电出现快波时，皮层的乙酰胆碱释放明明显增加；用组织化学法显示脑干网状结构的乙酰胆碱上行通路，发现其与脑干网状结构上行激动系统通路有相似之外。
尾核含有丰富的乙酰胆碱、胆碱乙酰移位酶和胆碱酯酶，尾核内有较多的神经元对乙酰胆碱敏感，壳核与苍白球内某些神经元也对乙酰胆碱敏感。由此看来，纹状体内存在乙酰胆碱递质系统。
此外，边缘系统的梨状区、杏仁核、海马内某些神经元对乙酰胆碱也起兴奋反应，这种反应能被阿托品阻断，说明这些部位也可能存在乙酰胆碱递质系统。
综上所述，乙酰胆碱肯定是中枢的递质，而且分布比较广泛。
单胺类单胺类递质是指多巴胺、去甲肾上腺素和5-羟色胺。由于动物实验中采用了荧光组织化学方法，对中枢内单胺类递质系统了解得比较清楚。
单胺类递质的通径多巴胺递质系统主要包括三部位：黑质-纹状体部分、中脑边缘系统部分和结节、漏斗部分。黑质-纹状体部分的多巴胺能神经元位于中脑黑质，其神经纤维投射到纹状体。脑内的多巴胺主要由黑质制造，沿黑质-纹状体投射系统分布，在纹状体贮存（其中以尾核含量最多）。破坏黑质或切断黑质-纹状体束，纹状体中多巴胺的含量即降低。用电生理微电泳法将多巴胺作用于纹状体神经元，主要起抑制反应。中脑位于边缘部分的多巴胺能神经元位于中脑脚间核头端的背侧部位，其神经纤维投射到边缘前脑。结节-漏斗部分的多巴胺能神经元位于下丘脑弓状核，其神经纤维投射到正中隆起。
去甲肾上腺素系统比较集中，极大多数的去甲肾上腺素能神经元位于低位脑干，尤其是中脑网状结构、脑桥的蓝斑以及延髓网状结构的腹外侧部分。按其纤维投射途径的不同，可分为三部分：上行部分、下行部分和支配低位脑干部分。上行部分的纤维投射到大脑皮层，边缘前脑和下丘脑。下行部分的纤维下达脊髓背角的胶质区、侧角和前角。支配低位脑干部分的纤维，分布在低位脑干内部。
5-羟色胺递质系统也比较集中，其神经元主要位于低位脑干近中线区的中缝核内。按其纤维投射途径的不同，也可分为三部分：上行部分、下行部分和支配低位脑干部分。上行部分的神经元位于中缝核上部，其神经纤维投射到纹状体、丘脑、下丘脑、边缘前脑和大脑皮层。脑内5-羟色胺主要来自中缝核上部，破坏中缝核上部可使脑内5-羟色胺含量明显降低。下行部分的神经元位于中缝核下部，其神经纤维下达脊髓背角的胶质区、侧角和前角。支配低位脑干部分的纤维，分布在低位脑干内部。
氨基酸类氨基酸类 现快明确存在氨基酸类递质，例如谷氨酸、门冬氨酸、甘氨酸和γ-氨基丁酸。
在脑脊髓内谷氨酸含量很多，分布很广，但相对来看，大脑半球和脊髓背侧部分含量较高。用电生物微电泳法将谷氨酸作用于皮层神经元和脊髓运动神经地，可引致突触后膜出现类似兴奋性突触后电位的反应，并可导致神经元放电。由此设想，谷氨酸可能是感觉传入神经纤维（粗纤维类）和大脑皮层内的兴奋型递质。
用电生理微电泳法将甘氨酸作用于脊髓运动神经元，可引致突触后膜出现类似抑制性突触后电位的反应。闰绍细胞轴突末梢释放的递质就是甘氨酸，它对运动神经元起抑制作用。
γ-氨基丁酸在大脑皮层的浅层和小脑皮层的浦肯野细胞层含量较高。用电生理微电泳法将γ-氨基丁酸作用于大脑皮层神经元和前庭外侧核神经元（直接受小脑皮层浦肯野细胞支配），可引致突触后膜超极化。由此设想，γ-氨基丁酸可能是大脑皮层部分神经元和小脑皮层浦肯野细胞的抑制性递质。此外，纹状体-黑质的纤维，也是释放γ-氨基西酸递质的。
上述的抑制是突触后膜发生超极化而发生的，因此是突触后抑制。所以甘氨酸和γ-氨基丁酸均是突触后抑制的递质。已知，γ-氨基丁酸也是突触前抑制的递质；当γ-氨基丁酸作用于轴突末梢时可引致末梢支极化，使末梢在冲动抵达时递质释放量减少，从而产生抑制效应（参见第二节）。γ-氨基丁酸对细胞体膜产生超极化，而对末梢轴突膜却产生去极化，其机制尚不完全清楚。有人认为，γ-氨基丁酸的作用是使膜对CI-的通透性增升高；在细胞体膜对CI-的通透性升高时，由于细胞外CI-浓度比细胞内CI-浓度高，CI-由细胞外进入细胞内，因此产生超极化；在末梢轴突膜对CI-通透性升高时，由于轴浆内CI-浓度比轴突外CI-高，CI-由轴突内流向轴突外，因此产生去极化。所以γ-氨基丁酸的作用是使CI-通透性升高，造成超极化还是去极化，取决于细胞内外CI-的浓度差。
肽类早已知道神经元能分泌肽类化学物质，例如视上核和室旁核神经元分泌升压素（九肽）和催产素（九肽）；下丘脑内其他肽能神经元能分泌多种调节腺垂体活动的多肽，如促甲状腺释放激素（TRH，三肽）、促性腺素释放激素（GnRH，十肽）、生长抑素（GHRIH，十四肽）等。由于这些肽类物质在分泌后，要通过血液循环才能作用于效应细胞，因此称为神经激素。但现已知，这些肽类物质可能还是神经递质。例如，室旁核有向脑干和脊髓投射的纤维，具有调节交感和副交感神经活动的作用（其递质为催产素），并能抑制痛觉（其递质为升压素）。在下丘脑以外脑区存在TRH和相应的受体，TRH能直接影响神经元的放电活动，提示TRH可能是神经递质。
脑内具有吗啡样活性的多肽，称为阿片样肽。阿片样肽包括β-内啡肽、脑啡肽和强啡肽三类。脑啡肽是五肽化合物，有甲硫氨酸脑啡肽（M-ENK）和亮氨酸脑啡肽（L-ENK）两种。脑啡肽与阿片受体常相伴而存在，微电泳啡肽可命名大脑皮层、纹状体和中脑导水管周围灰质神经元的放电受到抑制。脑啡肽在脊髓背角胶质区浓度很高，它可能是调节痛觉纤维传入活动的神经递质。
脑内还有胃肠肽存在，例如胆囊收缩素（CCK）、促胰液素、胃泌素、胃动素、血管活性肠肽、胰高血糖素等。CCK有抑制摄食行为的作用。许多胆碱能神经元中含有血管活性肠肽，它可能具有加强乙酰胆碱作用的功能。此外，脑内还有其他肽类物质，例如P物质、神经降压素、血管紧张素Ⅱ等。P物质是十一肽，它可能是第一级感觉神经元（属于细纤维类）释放的兴奋性递质，与痛觉传入活动有关。神经降压素在边缘系统中存在。血管紧张素Ⅱ的主要作用可能在于调节单受类纤维的递质释放。
其他其他可能的递质研究指出，一氧化氮具有许多神经递质的特征。某些神经元含有一氧化氮合成酶，该酶能使精氨酸生成一氧化氮。生成的一氧化氮从一个神经元弥散到另一神经元中，而后作用于鸟苷酸环化酶并提高其活力，从而发挥出生理作用。因此，一氧化氮是一个神经元间信息沟通的传递物质，但与一般递质有区别：
①它不贮存于突触小泡中；
②它的释放不依赖于出胞作用，而是通过弥散；
③它不作用于靶细胞膜上的受体蛋白，而是作用于鸟苷酸环化酶。一氧化氮与突触活动的可塑性可能有关，因为用一氧化氮合成酶抑制剂后，海马的第时程增强效应被完全阻断（参见第六节中“学习和记忆的机制”）。此外，组织胺也可能是脑内的神经递质。
7递质调质编辑
递质是指神经末梢释放的特殊化学物质，它能作用于支配的神经元或效应细胞膜上的受体，从而完成信息传递功能。
调质是指神经元产生的另一类化学物质，它能调节信息传递的效率，增强或削弱递质的效应。
但是也有人把递质概念规定得非常严格，认为只有作用于膜受体后导致离子通道开放从而产生兴奋或抑制的化学物质才能称为递质；其他一些作用于膜受体后通过第二信使转而改变膜的兴奋性或其它递质释放的化学物质，均应称为调质。根据后一种观点，递质为数不多，氨基酸类物质是递质，神经肌接头部位释放的乙酰胆碱也是递质，而肽类物质一般均属于调质。但是一般来说，递质与调质无明确划分的界限，调质是从递质中派生出来的概念，不少情况下递质包含调质；前文就没有把两者严格区分开来，统称为递质。
8戴尔原则编辑
长期来认为，一个神经元内只存在一种递质，其全部神经末梢均释放同一种递质。这一原则称为戴尔原则（Dale’s principle）。通过免疫组织化学方法观察到，一个神经元内可存在两种或两种以上递质（包括调质），因此认为戴尔原则并不正确。但是戴尔的原先观点认为，一个神经元的全部神经末梢均释放相同的递质；他并没有限定一个神经元只能含一种递质。因此，戴尔的观点还是对的，而戴尔原则则是需要修改的。
在无脊椎动物的神经元中，观察到多巴胺和5-羟色胺递质可以共存。在高等动物的交感神经节神经节发育过程中，去甲肾上腺素和乙酰胆碱可以共存。此外，在大鼠延髓的神经元中观察到5-羟色胺和P物质共存；在上颈交感神经节中神经元中观察到去甲肾上腺素和脑啡肽共存。有人认为肽类递质可能都是与其他递质共存的。递质共存的生理意义，目前尚未清楚了解；可能两种递质在同时释放后起着不同的生理作用，有利于发挥突触传递作用。
9递质使用编辑
递质的合成乙酰胆碱是由胆碱和乙酰辅酶A在胆碱乙酰移位酶（胆碱乙酰化酶）的催化作用下合成的。由于该酶存在于胞浆中，因此乙酰胆碱在胞浆中合成，合成后由小泡摄取并贮存起来。去甲肾上腺素的合成以酪氨酸为原料，首先在酪氨酸羟化酶的催化作用下合成多巴，再在多巴脱羧酶（氨基酸脱竣酶）作用下合成多巴胺（儿茶酚乙胺），这二步是在胞浆中进行的；然后多巴胺被摄取入小泡，在小泡中由多巴胺β羟化酶催化进一步合成去甲肾上腺素，并贮存于小泡内。多巴胺的合成与去甲肾上腺素揆民前二步是完全一样的，只是在多巴胺进入小泡后不再合成去甲肾上腺素而已，因为贮存多巴胺的小铴内不含多巴胺β羟化酶。5-羟色胺的合成以色氨酸为原料，首先在色氨酸羟化酶作用下合成5-羟色氨酸，再在5-羟色胺酸脱竣酶（氨基酸脱竣酶）作用下将5-羟色氨酸合成5-羟色胺，这二步是在胞浆中进行的；然后5-羟色胺被摄取入小泡，并贮存于小泡内。γ-氨基丁酸是谷氨酸在谷氨酸脱羧催化作用下合成的。肽类递质的合成与其他肽类激素的合成完全一样，它是由基因调控的，并在核糖体上通过翻译而合成的。
递质的释放当神经冲动抵达末梢时，末梢产生动作电位和离子转移Ca2+由膜外进入膜内，使一定数量的小泡与突触前膜紧贴融合起来，然后小泡与突触前膜粘合处出现破裂口，小泡内递质和其他内容物就释放到突触间隙内。突触前膜释放递质的过程，称为出胞（exocytosis）或胞裂外排。在这一过程中，Ca2+的转移很重要。如果减少细胞外Ca2+浓度，则递质释放就受到抑制；而增加细胞外Ca2+的浓度则递质释放增加。这一事实说明，Ca2+由膜外进入膜内的数量多少，直接关系到递质的释放量；Ca2+是小泡膜与突触前膜紧贴融合的必要因素。一般认为，Ca2+可能有两方面的作用：
①降低轴浆的粘度，有利于小泡的移动；
②消除突触前膜内的负电位，便于小泡与突触前膜接触而发生融合。小泡破裂把递质和其他内容物释放到突触间隙时，其外壳仍可留在突触前膜内（也可与突触前膜融合，成为突触前膜的组成部分），以后仍旧可以重新恢复原样，继续合成并贮存递质。
从突触小泡的胞吐作用到小泡膜的回复可分为下列6个时相：
①突触小泡靠进突触前膜活性带；
②小泡贴靠突触栅栏结构；
③小泡与突触前膜接触和两膜融合；
④融合膜裂开向突触间隙释放神经递质；
⑤小泡膜并入突触前膜质；
⑥小泡膜回收并重新利用。在小泡膜的循环过程中，有一些膜不形成功能性小泡不进入循环而是被溶酶体降解并通过逆向轴浆运输返回胞体重新加工。同时通过顺向轴浆运输将新的小泡送往神经终末。
神经递质由突触前膜释放后立即与相应的突触后膜受体结合，产生突触去极化电位或超极化电位。导致突触后神经兴奋性升高或降低。自此，神经冲动的电信号就完成了对突触间的一次跨越。
突触处递质释放过程
递质的失活进入突触间隙的乙酰胆碱作用于突触后膜发挥生理作用后，就被胆碱酯酶水解成胆碱和乙酸，这样乙酰胆碱就被破坏而推动了作用，这一过程称为失活。去甲肾上腺素进入突触间隙并发挥生理作用后，一部分被血液循环带走，再在肝中被破坏失活；另一部分在效应细胞内由儿茶酚胺内由儿茶酚胺位甲基移位酶和单胺氧化酶的作用而被破坏失活；但大部分是由突触前膜将去甲肾上腺素再摄取，回收到突触前膜处的轴浆内并重新加以利用。多巴胺的失活与去甲肾上腺素的失活相似，它也是由儿茶酚胺氧位甲基移位酶和单胺氧化酶的作用而被破坏失活。突触前膜也能再摄取多巴胺加以重新利用。5-羟色胺的失活也与去甲肾上腺素的失活相似，单胺氧化酶等能使5-羟色胺降解破坏，突触前膜也能再摄取5-羟色胺加以重新利用。氨基酸递质在发挥作用后，能被神经元和神经胶质再摄取而失活。肽类递质的失活是依靠酶促降解，例如通过氨基肽酶、羧基肽酶和一些内肽酶的降解而失活。
10受体学说编辑
胆碱上世纪末发现阿托品能阻断副交感神经节后纤维对效应器的作用，当时认为效应器具具有一种接受物质，阿托品与接受物质结合后就阻断了副交感神经的作用。研究证实了这一设想，例如刺激支配颌下腺的副交感神经则唾液分泌量增加，如果先用阿托品后再刺激神经则唾液分泌量不再增加，而此时末梢乙酰胆碱的释放量并不见减少。这说明阿托品不影响神经末梢递质的释放过程，而是直接作用于效应器上。效应器上的接受物质后来就称为受体。
递质的受体一般是指突触后膜或效应器细胞膜上的某些特殊部分，神经递质必须通过与受体相结合才能发挥作用。受体的本质和发挥作用和机制已在第二章详述。如果受体事先被药物结合，则递质就很难再与受体相结合，于是递质就不能发挥作用。这种能与受体相结合，从而占据受体或改变受体的空间结构形式，使递质不以发挥作用的药物称为受体阻断剂。
受体阻断剂 的不断发现，对递质与受体的作用关系有了更多的了解。前文述及乙酰胆碱有两种作用，实际上是由于存在两种不同的乙酰胆碱能受体而形成的。一种受体广泛存在于副交感神经节后纤维支配的效应细胞上，当乙酰胆碱与这类受体结合后就产生一系列副交感神经末梢兴奋的效应，包括心脏活动的抑制、支气管平滑肌的收缩、胃肠平滑肌的收缩、膀胱逼尿肌的收缩、虹膜环形肌的收缩、消化腺分泌的增加等。这类受体也能与毒蕈碱相结合，产生相似的效应。因此这类受体称为毒蕈碱受体（M型受体，muscarinic receptor），而乙酰胆碱与之结合所产生的效应称为毒蕈碱样作用（M样作用）。阿托品是M型受体阻断剂，它仅能和M型受体结合，从而阻断乙酰胆碱的M样作用。
另一种胆碱能受体存在于交感和副交感神经节神经元的突触后膜和神经肌接头的终板膜上，当乙酰胆碱与这类受体结合后就产生兴奋性突触后电位和终板电位，导致节神经元和骨骼肌的兴奋。这类受体也能与菸碱相结合，产生相似的效应。因此这类受体也称为菸碱型受体（N型受体，nicotinic receptor），而乙酰胆碱与之结合所产生的效应称为菸碱样作用（N样作用）。
通过采用不同受体阻断剂的研究，现已证明M型和N型受体均可进一步分出向种亚型。M型受体至少已分出M1、M2和M3三种亚型：M1受体主要分布在神经组织中；M2受体主要分布在心脏，在神经和平滑肌上也有少量分布；M3受体主要分布在外分泌腺上，神经和平滑肌也有少量分布。N型受体可分出N1和N2两种亚型。神经节神经元突触后膜上的受体为N1受体，终板膜上的受体为N2受体。简箭毒能阻断N1和N2受体的功能，六烃季铵主要阻断N1受体的功能，十烃季铵主要阻断N2受体的功能，从而阻断乙酰胆碱的N样作用。
支配汁腺的交感神经和骨骼肌的交感舒血管纤维，其递质也是乙酰胆碱；由于阿托品能阻断其作用，所以属于M型受体。
肾上腺素多数的交感神经节后纤维释放的递质是去甲肾上腺素，其对效应器的作用既有兴奋性的，也有抑制性的。效应不同的机制是由于效应器细胞上的受体不同。能与儿茶酚胺（包括去甲肾上腺素、肾上腺素等）结合的受体有两类，一类为α型肾上腺素能受体（简称α受体），另一类为β型肾上腺素能受体（简称β受体）。儿茶酚胺与α受体结合的产生的平滑肌效应主要是兴奋性的，包括血管收缩、子宫收缩、虹膜辐射状肌收缩等；但也有抑制性的，如小肠舒张。儿茶酚胺与β受体结合后产生的平滑肌效应是抑制性的，包括血管舒张、子宫舒张、小肠舒张、支气管舒张等；但产生的心肌效应却是兴奋性的。有的效应器仅有α受体，有的仅有β受体，有的α和β受体均有（表10-3）。心肌细胞上除有β受体外，也有α受体，但受体的作用较明显。例如，心肌α受体兴奋可引致收缩力加强，但其作用比β受体兴奋的作用要弱；而且心肌β受体兴奋可引致心率加快，而α受体却不能加快心率。
分布及效应效应器受体
效应
眼
虹膜辐射状肌 α1 收缩（扩瞳）
睫状体肌 β2 舒张
心
窦房结β1 心率加快
房室传导系统 β1 传导加快
心肌α1，β1 收缩加强
血管
冠状血管α1 收缩
β2（主要）舒张
皮肤粘膜血管 α1 收缩
骨骼肌血管 α 收缩
β2（主要）舒张
脑血管α1 收缩
腹腔内脏血管 α1（主要）收缩
β2 舒张
唾液腺血管 α1 收缩
支气管
支气管平滑肌 β2 舒张
胃肠
胃平滑肌 β2 舒张
小肠平滑肌 α2 舒张（可能是胆碱能纤维的突触前受体，调制乙酰胆碱的释放）
β2 舒张
括约肌α1 收缩
膀胱
逼尿肌β2 舒张
三角区和括约肌 α1 收缩
子宫
子宫平滑肌 α1 收缩（有孕子宫）
β2 舒张（无孕子宫）
皮肤
竖毛肌α1 收缩
糖酵解代谢β2 增加
脂肪分解代谢β1 增加
α和β受体不仅对交感神经末梢释放递质起反庆，也对血液中存在的儿茶酚胺（由肾上腺髓质分泌或注射的药物）起反应。去甲肾上腺素对α受体的作用强，对β受体的作用较弱；肾上腺素对α和β受体的作用都强；异丙肾上腺素主要对β受体有强烈作用。如在动物实验中观察血压的变化，见到注射去甲肾上腺素后血压上升，这是由于α受体被激活引致广泛血管收缩而形成的；如注射异丙肾上腺素，则见到血压下降，这是由于β受体被激活导致广泛血管舒张而形成的；如注射肾上腺素，则血压先升高后下降，这是由于α和β受体均被激活，引致广泛血管先收缩后舒张而形成的。如果，进一步采用不同的受体阻断剂进行实验，见到α受体阻断剂酚妥拉明可以消除去甲肾上腺素和肾上腺素的升压效应，但不影响肾上腺素和异丙肾上腺素的降压效应；而β受体阻断剂普萘洛尔（propranolol）可以消除肾上腺素和异丙肾上腺素的降压效应，但不影响去甲肾上腺素和肾上腺素的升压效应。由此说明，确实存在两种不贩肾上腺素能受体，即α受体和β受体，两者能分别被特异的受体阻断剂所阻断。
β受体阻断剂已应用于临床。例如，心绞痛患者应用普萘洛尔可以降低心肌的代谢和活动，得到治疗的效果。但普萘洛尔阻断β受体的作用很广泛，应用后可同时此致支气管痉挛，对伴有呼吸系统疾病的患者有危险性。研究发现，有些β受体阻断剂主要阻断心肌的β受体，而对支气管平滑肌的β受体阻断作用很小，例如阿替洛尔（atenilol）、心得宁（practolol）；有些受体阻断剂对心肌的β受体阻断作用极小，而对支气管平滑肌的β受体阻断作用却很强，例如心得乐（butoxamine）。由此认为，β受体可分别分为β1和β2两个亚型，其分布及效应见表10-3。在伴有呼吸系统疾病的患者，应采用阿替洛尔，以免发生支气管痉挛。
突触研究指出，受体不仅存在于突触后膜，而且存在于突触前膜，突触前膜的受体称为突触前受体（presynaptic receptor）。突触前受体的作用，在于调节神经末梢的递质释放。例如，肾上腺素能纤维末梢的突触前膜上存在α受体，当末梢释放的去甲肾上腺素在突触前膜处超过一定量时，即能与突触前α受体结合，从而反馈抑制末梢产生和释放去甲肾上腺素，起到调节末梢递质释放能量的作用。在应用α受体阻断剂后，这种反馈抑制环节被阻断；这时刺激肾上腺素能纤维，末梢内合成和释放去甲肾上腺素增加。这种情况在支配心肌的肾上腺素能纤维上也存在，虽然心肌的受体为β受体，而突触前膜上的受体为α受体。由于突触前受体是感受神经末梢自身释放的递质的，因此又称为自身受体（autoreceptor）。
突触前膜的α受体不同于后膜的α受体，前者为α2型，后者为α1型。α受体区分为α1和α2两个亚型，是根据不同受体阻断剂的选择性作用来确定的。如哌唑嗪（prazosin）可选择性阻断α1受体，而育亨宾（yohimbine）可选择性阻断α2受体；酚妥拉明对α1和α2受体均有阻断作用，但对α1受体的作用比对α2受体的作用大3-5倍。必须指出，α2受体也可存在于突触后膜上，例如大脑皮层、子宫、腮腺等处突触后膜可能有α2受体。此外，突触前受体除α2型外，也可有其他类型。
中枢内递质中枢递质种类复杂，因此相应的受体也多，除胆碱能N型和M型受体、肾上腺素能α和β受体外，还有多巴胺受体、5-羟色胺受体、兴奋性氨基酸受体、γ-氨基丁酸受体、甘氨酸受体，阿片受体（opiate receptor）等。多巴胺受体可分为D1、D2等受体亚型，5-羟色胺受体可分为5-HT1、5-HT2、5-HT3、5-HT4等受体亚型，兴奋性氨基酸受体可分为N-甲基-D-天冬氨酸型（NMDA）。使君子氨酸型（QA）和海人藻酸型（KA）等，γ-氨基丁酸受体可分为GABAA、GABAB等受体亚型，阿片受体可分为μ、δ、κ等受体亚型。这些受体也有相应的受体阻断剂，例如派迷清（pimozide）能阻断多巴胺受体，肉桂硫胺(cinanserin)能阻断5-羟色胺受体，荷包牡丹碱(bicuculine)能阻断GABAA受体，钠洛酪(naloxone)能阻断阿片μ受体等。
中枢神经递质是在中枢神经系统内将信息由一个神经元传到另一个神经元的介导物质，绝大部分是在神经元胞体内合成、储存在突触小泡内，并运送至突触。
当神经冲动传到突触时，突触小泡释放神经递质发挥信息传递作用。
11经典神经编辑
经典神经递质是人们长期研究的一些小分子化合物，已经明确的有乙酰胆碱(Ach)；单胺类、包括肾上腺素(E)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)；氨基酸类、包括谷氨酸、天冬氨酸、γ-氨基丁酸(GABA)、甘氨酸等。这些神经递质通过传递各种信息而实现调节机体生理功能的作用。如Ach，在中枢神经系统中，末梢释放Ach的神经元(称胆碱能神经元)广泛分布在脑干及前脑，故发挥作用较广。Ach主要参于机体心血管活动、摄食、饮水、睡眠、觉醒、感觉和运动的调节。研究发现Ach对学习和记忆也有调节作用，某些神经疾病和老年健忘症等都与脑内Ach的含量有关。去甲肾上腺能神经元主要分布在脑桥和延髓的一些核群里，NE参与多种生理功能的调节，主要是对心、血管活动、体温、情绪活动的调节，也与维持大脑皮质的觉醒状态有关。脑内的氨基酸中以谷氨酸和GABA含量最高。谷氨酸对大脑皮质细胞有普遍而强烈的兴奋作用，GABA在脑内是一种抑制性递质，癫痫病人与皮质中GABA含量降低有关。
12神经肽质编辑
在中枢神经系统内发现不少具有生命活性的大分子物质，它们是由一些氨基酸组成的多肽类，被称为神经肽。由于神经肽也参与中枢神经系统内的突触传递，所以也被认为是中枢神经递质。发现的神经肽种类很多，可分为垂体肽、下丘脑释放激素、脑肠肽、内阿片肽、速激肽及其它肽等几大类。不同的神经肽通过信息传递调节机体各种生理活动。如最早发现的P物质，是初级感觉神经元末梢释放的兴奋递质，与痛觉有关，有强烈的抗吗啡作用。P物质还与纹状体-黑质系统中DA神经元活动有关。内阿片肽是近些年来发现的多肽，包括内啡呔类、脑啡呔类和强啡呔类，在脑内呈不均匀的分布。作用极为广泛，包括对神经、呼吸、循环、消化、泌尿、生殖、内分泌、感觉、运动、免疫等功能的调节，特别对痛觉作用极为突出。甘丙肽也是近几年发现的存在于外周和中枢神经系统中的生物活性肽。具有调节胃肠、泌尿生殖系统平滑肌收缩、抑制胰岛素分泌、促进垂体生长激素、催产素释放等生理功能，并有加强吗啡脊髓镇痛和抑制Ach参与的记忆过程等作用。
神经肽与经典递质不同的是神经肽的合成比经典递质要复杂。如NE是以酪氨酸为原料，经二步羟化、一步脱羧等三个步骤即可生成最终产物。而神经肽类合成是在神经元细胞体内核糖体上先合成无活性的大分子前体蛋白，再转运到内质网、高尔基复合体同酶类一起装入形成的分泌颗粒或囊泡内，经轴浆运输转运到末梢，在转运中经多种水解酶的作用，逐步被切割成有活性的神经肽。从作用效率来看，经典递质一般起效快，失效也快。而神经肽一般起效慢，作用持久，所以神经肽不但起神经递质作用，也起调质作用。另外经典递质发挥作用后，解体失活，重新摄入突触前末梢再利用。而多肽在发挥作用后被酶解失活，不再重新摄取。
13递质共存编辑
发现的小分子递质和大分子递质有100种以上，原认为一个神经元只合成一种递质，但发现一个神经元内可合成或者分泌两种以上的经典递质或两种以上的神经肽，一个神经元也可合成经典递质和神经肽，人们把这种现象叫递质共存。共存递质的释放主要是神经元末梢内存在有两种大小不同的囊泡，经典递质储存在大、小两种囊泡里，而神经肽与经典递质共同储存在大囊泡里。低频率信息可使小囊泡释放，高频率信息则使大囊泡释放。这样经典递质和神经肽共同释放，共同传递信息，可起相互协同作用或拮抗作用，有效地调节细胞或器官的生理功能，还可通过突触前互相调节来改变递质的释放量，有利于加强或减弱作用强度。
氢化可的松
氢化可的松是人工合成也是天然存在的糖皮质激素，抗炎作用为可的松的1．25倍，也具有免疫抑制作用、抗毒作用、抗休克及一定的盐皮质激素活性等，并有留水、留钠及排钾作用，血浆半衰期为8～12小时。本药可以引起变态反应，有2例静脉注射后出现了包括呼吸系统损伤的致死性的过敏性休克反应。支气管哮喘的病人经鼻内吸入或静脉注射氢化可的松醋酸酯，也可能引起过敏性休克。。
药理作用1.抗炎作用：氢化可的松的抗炎作用为可的松的1.25倍，在药理剂量时对感染性和非感染性炎症均有抑制作用。氢化可的松能增加血管的紧张性，减轻充血，降低毛细血管的通透性，因此减轻渗出、水肿；通过抑制炎症细胞（包括巨噬细胞和白细胞）在炎症部位的聚集，并抑制吞噬细胞的功能，稳定溶酶体膜，阻止补体参与炎症反应以及炎症化学中介物（如前列腺素、血栓素、白三烯）的合成与释放，从而缓解红、肿、热、痛等症状。
2.免疫抑制作用：包括防止或抑制细胞介导的免疫反应，延迟性的过敏反应，减少T淋巴细胞、单核细胞、嗜酸粒细胞的数目，降低免疫球蛋白与细胞表面受体的结合能力，并抑制白介素的合成与释放，从而降低T淋巴细胞向淋巴母细胞转化，并减轻原发免疫反应的扩展。氢化可的松及其他糖皮质激素类药物还可降低免疫复合物通过基底膜，并能减少补体成分及免疫球蛋白的浓度；能解除许多过敏性疾病的症状，抑制因过敏反应而产生的病理变化，如过敏性充血、水肿、渗出、皮疹、平滑肌痉挛及细胞损害等，能抑制组织器官的移植排斥反应，对于自身免疫性疾病也能发挥一定的近期疗效。
3.抗毒素作用：氢化可的松及其他糖皮质激素能提高机体对有害刺激的应激能力，减轻细菌内毒素对机体的损害，缓解毒血症症状，对感染毒血症的高热有退热作用。退热机制可能与其抑制体温中枢对致热原的反应、稳定溶酶体膜、减少内源性致热原的释放有关。
4.抗休克作用：氢化可的松及其他糖皮质激素对中毒性休克、低血容量性休克、心源性休克都有对抗作用。抗休克的作用与下列因素有关：（1）扩张痉挛收缩的血管和兴奋心脏，加强心脏收缩力；（2）抑制某些炎性因子的产生，减轻全身炎症反应综合征及组织损伤，使微循环血流动力学恢复正常，改善休克状态；（3）稳定溶酶体膜，减少心肌抑制因子的形成：（4）提高机体对细菌内毒素的耐受力。
5.对代谢的影响：（1）通过促进糖原异生、减慢葡萄糖分解、减少机体组织对葡萄糖的利用等方面的作用来增高肝糖原，升高血糖：（2）提高蛋白质的分解代谢，增加血清氨基酸和尿中氮的排泄量，造成负氮平衡。而且大剂量还能抑制蛋白质合成；（3）可增高血浆胆固醇，激活四肢皮下的酯酶，促使皮下脂肪分解，而重新分布在面部、上胸部、颈背部、腹部和臀部，形成向心性肥胖：（4）氢化可的松有一定的盐皮质激素样作用，可增强钠离子再吸收及钾，钙、磷的排泄。
6.对血液和造血系统的作用：能刺激骨髓的造血功能，使红细胞和血红蛋白含量增加，大剂量可能使血小板增多并提高纤维蛋白原浓度，缩短凝血时间。此外，可使血液中嗜酸粒细胞及淋巴细胞减少。
7.其他：能减轻结缔组织的病理增生，提高中枢神经系统的兴奋性，促进胃酸及胃蛋白酶分泌等 [3]
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药代动力学氢化可的松口服吸收快而完全，tmax为1～2h，每次服药可维持8～12h。磷酸酯或琥珀磷酸酯水溶性增加，肌内或皮下注射后迅速吸收，tmax为1h。但醋酸氢化可的氢化可的松的溶解度很差，一般用其混悬液。肌内注射吸收缓慢，每次注射可维持24h。如作关节腔内注射，每次注射可维持约1周。氢化可的松进入血液后，蛋白结合率（BPCR）约90%，其中80%与皮质激素转运蛋白结合，10%与白蛋白结合，主要在肝脏代谢，最终以葡萄糖醛酸或硫酸结合形式及部分未结合形式由尿排出。半衰期为80～144min，生物学作用半衰期约为8～12h。氢化可的松可自消化道迅速吸收，亦可经皮肤吸收，尤其在皮肤破损处吸收更快[3]
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适用症1.急、慢性肾上腺皮质功能减退（包括肾上腺危象）、腺垂体功能减退及肾上腺次全切除术后行替代治疗。
2.严重感染并发的毒血症：如中毒性肺炎、中毒性痢疾、暴发型脑膜炎球菌性脑膜球菌性脑膜炎（流行性脑脊髓膜炎）、暴发型肝炎、重症伤寒、急性粟粒性肺结核、猩红热、败血症等。在应用有效的抗生素控制感染的同时，可用氢化可的松作辅助治疗。
3.过敏性疾病：如支气管哮喘、哮喘持续状态、血清病、血管神经性水肿等可用氢化可的松缓解症状。
4.抗休克治疗：感染中毒性休克，在应用抗生素的同时，可早期、短时间、大剂量突击使用氢化可的松，产生效果后即可停药。对过敏性休克，可与首选药肾上腺素合用。低血容量休克时，首先应补液、补充电解质或输血，疗效不佳时可合用氢化可的松。
5.防止某些炎症的后遗症：如结核性脑膜炎、胸膜炎，心包炎、风湿性心瓣膜炎、虹膜炎、角膜炎、视网膜炎、视神经炎、烧伤等，早期应用可防止后遗症的发生。
6.其他：甲状腺危象、器官移植术后的急性排异反应、严重天疱疮、红皮病（剥脱性皮炎）等可应用氢化可的松。对关节炎、腱鞘炎、肌腱劳损等可鞘内注射或关节腔注射。对接触性皮炎、湿疹、银屑病（牛皮癣）等可局部用药。
7.抗毒素作用：提高机体对细菌内毒素的耐受力，缓和机体对内毒素的反应，减轻细胞损伤，缓解毒血症状。并能抑制下丘脑对致热原的反应，抑制白细胞致热原的生成和释放，降低体温调节中枢对致热原的敏感性，对高热有退热作用。
8.抗休克作用：能抑制缩血管活性物质的缩血管作用，解除小动脉痉挛，稳定溶酶体膜，减少心肌抑制因子的形成。防止蛋白水解酶的释放以及由心肌抑制因子引起的心肌收缩减弱，防止心排血量降低和内脏血管收缩等循环障碍，改善微循环，对中毒性休克、低血容量性休克、心源性休克都有对抗作用。
9.对消化系统的作用：能刺激消化腺的分泌功能，促进胃酸和胃蛋白酶分泌，可提高食欲、促进消化。
10.减轻结缔组织的病理增生。用于接触性皮炎、脂溢性皮炎、神经性皮炎、皮肤瘙痒症和较小范围的银屑病等。
11.2.5%醋酸氢化可的氢化可的松混悬液用于皮损内注射，每次0.5～1ml，与0.5%～1%普鲁卡因2～5ml混匀后使用。
12.1%醋酸氢化可的氢化可的松软膏用于皮炎湿疹等，皮炎膜用于神经性皮炎。局部用于眼科及皮肤过敏性疾病 [3]
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用量用法1.醋酸氢化可的松片：口服每次1片（含药20mg），1日1～2次。醋酸氢化可的松软膏，1%软膏，外用。醋酸氢化可的松滴眼液：每瓶5mg（3ml），滴眼，每次1～2滴。
2.皮炎膜（神经性皮炎气雾膜）：气雾剂喷射于皮损表面，即形成一层薄膜，可隔绝外界对皮损的各种刺激，使皮损处保持较长时间的稳定，再加上氢化可的松的抗炎作用，故对神经性皮炎有
氢化可的松
一定疗效。一般用后痒感减轻或完全消失，皮损逐渐改善，病程短的见效较快，痊愈率也较高，但痊愈后有复发。
3.摇匀后供关节注射与鞘内注射。关节腔内注射，每次1～2ml（每ml内含药25mg）；鞘内注射，每次1ml。替代治疗:成人每日20～25mg，晨服2/3，午餐后服1/3。
不良反应糖皮质激素在应用生理剂量替代治疗时无明显不良反应，不良反应多发生在应用药理剂量时，而且与疗程、剂量、用药种类、用法及给药途径等有密切关系。常见不良反应有以下几类。
（1）静脉迅速给予大剂量可能发生全身性的过敏反应，包括面部、鼻粘膜、眼睑肿胀，荨麻疹，气短，胸闷，喘鸣。长程用药可引起以下副作用：医源性柯兴综合征面容和体态、体重增加、下肢浮肿、紫纹、易出血倾向、创口愈合不良、痤疮、月经紊乱、肱或股骨头缺血性坏死、骨质疏松或骨折（包括
氢化可的松
脊椎压缩性骨折、长骨病理性骨折）、肌无力、肌萎缩、低血钾综合征、胃肠道刺激（恶心、呕吐）、胰腺炎、消化性溃疡或肠穿孔，儿童生长受到抑制、青光眼、白内障、良性颅内压升高综合征、糖耐量减退和糖尿病加重。
（2）患者可出现精神症状：欣快感、激动、不安、谵妄、定向力障碍，也可表现为抑制。精神症状尤易发生于患慢性消耗性疾病的人及以往有过精神不正常者。在用量达每日强的松40mg或更多，用药数日至二周即可出现。并发感染为糖皮质激素的主要不良反应。以真菌、结核菌、葡萄球菌、变形杆菌、绿脓杆菌和各种疱疹病毒感染为主。多发生在中程或长程疗法时，但亦可在短期用大剂量后出现。
（3）下丘脑-垂体-肾上腺轴受到抑制，为激素治疗的重要并发症，其发生与制剂、剂量、疗程等因素有关。每日用强的松20mg以上，历时3周以上，以及出现医源性柯兴综合征时，应考虑肾上腺功能已受到抑制。
（4）糖皮质激素停药后综合征可有以下各种不同的情况。①下丘脑-垂体-肾上腺功能减退，可表现为乏力、软弱、食欲减退、恶心、呕吐、血压偏低、长程治疗后此轴心功能的恢复一般需要9～12个月，功能恢复的先后依次为：i．下丘脑促肾上腺皮质激素释放素（CRF）分泌恢复并增多；ii．ACTH分泌恢复并高于正常，此时肾上腺皮质激素的分泌仍偏低；iii．氢皮质素的基础分泌恢复正常、垂体ACTH的分泌由原来偏多而恢复正常；iV．下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴对应激的反应恢复正常。②停药后原来疾病已被控制的症状重新出现。为了避免肾上腺皮质功能减退的发生及原来疾病症状的复燃，在长程激素治疗后应缓慢地逐渐减量，并由原来的一日服用数次，改为每日上午服药一次，或隔日上午服药一次。③糖皮质激素停药综合征。有时患者在停药后出现头晕、昏厥倾向、腹痛或背痛、低热、食欲减退、恶心、呕吐、肌肉或关节疼痛、头疼、乏力、软弱，经仔细检查如能排除肾上腺皮质功能减退和原来疾病的复燃，则可考虑为对糖皮质激素的依赖综合征。
大剂量长期使用可有肥胖，多毛症，痤疮，血糖，血压及眼压升高，水钠潴留，水肿。可引起低血钾，肌肉麻痹，兴奋，胃肠溃疡，甚至出现胃肠出血，穿孔，骨质疏松，病理性骨折，伤口不易愈合，白内障，失明。突然停药可引起停药综合征。
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狗仔卡
发表于 2020-2-4 16:38:03
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